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Raji-GFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/15 11:08:30
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详细内容
Raji-GFP-Puro稳转株
英文名称 | Raji-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H1104 |
中文名称 | GFP 标记的 Raji 稳转株 |
Lot number | Raji-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 淋巴母细胞样 |
生长特性 | 悬浮生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | RPMI-1640 + 10% FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
一、背景与构建
1. 亲本细胞特性
来源：Raji 细胞源于 Burkitt 淋巴瘤患者的淋巴结，是一种悬浮生长的 B 淋巴细胞系，具有高增殖活性和永生化特性，广泛应用于肿瘤生物学、免疫学、病毒学（如 EB 病毒研究）及药物筛选等领域。
特性：倍增时间约为 18-24 小时，表面表达多种 B 细胞标志物（如 CD19、CD20），易转染且适合稳定株构建。
2. 构建过程
载体设计：使用含 GFP 基因和 Puro 抗性基因的表达载体（如慢病毒载体、质粒载体），通过分子克隆技术将目的基因插入载体多克隆位点。
转染方法：
病毒感染：常用慢病毒或逆转录病毒包装系统，适用于难转染的悬浮细胞，感染效率高且整合稳定。
电穿孔 / 化学转染：适用于部分实验室条件，需优化参数以提高转染效率。
筛选与克隆化：转染后用嘌呤霉素（通常 2-5 µg/mL）筛选 2-3 周，存活细胞通过有限稀释法或流式细胞术（FACS）进行单克隆化，最终获得稳定表达 GFP 的单克隆株。
二、特性与应用
1. 生物学特性
荧光标记：
GFP 表达：稳定表达绿色荧光蛋白，激发波长约 488 nm，发射波长约 507 nm，可通过荧光显微镜、流式细胞仪或活体成像系统直接观察，信号强且背景低。
荧光稳定性：GFP 在细胞分裂过程中持续表达，适用于长期追踪（如细胞增殖、迁移、侵袭等动态过程）。
抗性标记：
嘌呤霉素抗性：携带 Puro 抗性基因，可在含 1-3 µg/mL 嘌呤霉素的培养基中长期维持筛选压力，防止目的基因丢失。
细胞生长：保持 Raji 细胞的悬浮生长特性，对数生长期细胞密度建议维持在（0.3-1.0）×106cells/mL，传代比例通常为 1:3-1:5，避免密度过高导致凋亡。
2. 应用场景
细胞示踪与成像：
体外研究：实时观察细胞形态、迁移路径（如 Transwell 实验）、药物处理后的凋亡 / 坏死变化（结合荧光染料如 PI）。
体内研究：移植到免疫缺陷小鼠（如 NSG 小鼠）中，通过活体荧光成像监测肿瘤生长、转移（如淋巴瘤模型），或研究免疫细胞与肿瘤微环境的相互作用。
药物筛选与毒性评估：
高通量筛选：利用 GFP 荧光强度或细胞数量变化（如流式细胞术检测GFP+细胞比例），快速评估药物对 Raji 细胞的增殖抑制或杀伤效果。
联合疗法研究：结合化疗药物、靶向药物（如 CD20 单抗）或基因编辑（如 CRISPR-Cas9），通过 GFP 标记追踪治疗响应。
基因功能研究：
过表达 / 敲低模型：作为宿主细胞导入外源基因（如癌基因、抑癌基因），通过 GFP 标记辅助筛选阳性克隆，研究基因对细胞周期、凋亡、代谢等通路的影响。
病毒感染模型：用于 EB 病毒、HIV 等病毒感染机制研究，GFP 可辅助监测病毒复制或宿主细胞反应。
三、培养与维护
1. 培养基与条件
基础培养基：RPMI 1640 培养基，添加 10% 胎牛血清（FBS，需热灭活）、1% 双抗（青霉素 100 U/mL + 链霉素 100 µg/mL）。
培养环境：37℃、5%CO2、饱和湿度，悬浮培养无需贴壁，建议使用透气培养瓶或摇瓶（转速 50-80 rpm，促进气体交换）。
2. 传代与筛选
常规传代：当细胞密度达 1×106cells/mL 以上时，按 1:3-1:5 比例传代，避免密度低于 0.2×106cells/mL 导致生长停滞。
抗性维持：
长期培养：建议在培养基中持续添加 1 µg/mL 嘌呤霉素（低浓度维持筛选压力），防止 GFP 表达丢失。
复苏 / 冻存：冻存液使用 90% FBS + 10% DMSO，冻存前可短暂提高嘌呤霉素浓度至 2 µg/mL 筛选 1-2 代，确保细胞纯度。
3. 质量控制
荧光检测：定期（每 2-4 周）通过流式细胞术检测 GFP 阳性率，要求≥95%。
细胞形态与活力：显微镜下观察细胞形态（圆形、大小均一、无大量死细胞），台盼蓝染色检测活力应＞90%。
支原体污染：每 1-2 个月进行支原体检测（如 PCR 法、试剂盒法），确保无污染。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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