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COV434-GFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/16 11:04:28
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详细内容
COV434-GFP-Puro稳转株
产品名称 | COV434-GFP-Puro 稳转株 |
产品货号 | XY-H1905 |
中文名称 | GFP 标记的 COV434 稳转株 |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | DMEM-H + 10% FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
一、背景与基本概念
细胞株来源
COV434 细胞：通常指人卵巢癌细胞株，来源于卵巢癌组织，具有恶性增殖特性，是研究卵巢癌分子机制的常用模型。
GFP（绿色荧光蛋白）：作为报告基因，表达后可发出绿色荧光，便于通过荧光显微镜或流式细胞术实时观察细胞内蛋白定位、细胞增殖或迁移等动态过程。
Puro（嘌呤霉素）：是一种抗生素，用于稳转株筛选。通过在载体中引入Puro 抗性基因，可筛选出成功整合目标基因的细胞克隆。
稳转株定义
指通过病毒感染（如慢病毒、逆转录病毒）或质粒转染等方式，将外源基因（如 GFP）稳定整合到细胞基因组中，使目的基因在细胞分裂过程中持续表达的细胞群体。
二、构建原理与流程
载体设计
构建含GFP 基因和Puro 抗性基因的表达载体（如质粒），通常采用四环素诱导型启动子或组成型启动子（如 CMV）驱动基因表达。
示例载体结构：
plaintext
[启动子] → GFP基因 → [终止子]
[启动子] → Puro抗性基因 → [终止子]
细胞转染与筛选
转染：通过脂质体转染、电穿孔或病毒感染（慢病毒更适用于难转染细胞）将载体导入 COV434 细胞。
筛选：转染后用嘌呤霉素（Puro）处理细胞，未成功整合抗性基因的细胞死亡，存活细胞即为稳定表达 GFP 的单克隆或多克隆稳转株。
单克隆验证
通过有限稀释法或流式细胞分选（FACS）获得单细胞克隆，经荧光显微镜观察、Western blot 检测 GFP 蛋白表达水平，确保基因稳定表达。
三、应用场景
细胞成像与追踪
利用 GFP 荧光特性，实时观察 COV434 细胞在体内外的迁移、侵袭或药物处理后的形态变化，常用于肿瘤微环境研究。
示例：通过活体成像技术追踪荷瘤小鼠体内 GFP 标记的 COV434 细胞转移路径。
药物筛选与毒性评估
在 Puro 筛选压力下，稳转株可用于高通量筛选抗肿瘤药物，通过荧光强度变化或细胞存活率判断药物对细胞增殖的影响。
优势：结合流式细胞术可快速量化药物处理后 GFP 阳性细胞比例，评估药物毒性或基因沉默效率。
基因功能研究
作为基础模型，可进一步敲除或过表达其他基因（如致癌基因、抑癌基因），结合 GFP 标记分析基因互作或信号通路变化。
案例：在 COV434-GFP-Puro 细胞中过表达 PTEN 基因，通过荧光共定位观察其与 AKT 信号通路蛋白的相互作用。
细胞示踪与动物模型
移植到免疫缺陷小鼠（如 NOD/SCID 小鼠）体内后，可通过荧光成像监测肿瘤生长动力学，用于抗血管生成药物或免疫治疗研究。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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