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HL-60-GFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/15 11:08:30
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详细内容
HL-60-GFP-Puro稳转株
英文名称 | HL-60-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H1109 |
中文名称 | GFP 标记的 HL-60 稳转株 |
Lot number | HL-60-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 髓母细胞样 |
生长特性 | 悬浮生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | IMDM + 20% FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
一、构建原理与方法
1. 载体设计
使用慢病毒载体（如 pLVX 系列），将 GFP 基因与 Puro 抗性基因串联，置于同一启动子（如 CMV）调控下，确保两者同步表达。
载体需包含病毒包装信号（如 ψ 序列）、筛选标记（Puro 抗性基因）及荧光标记（GFP）。
2. 病毒包装与细胞感染
包装细胞：将重组载体与慢病毒包装质粒（如 psPAX2、pMD2.G）共转染至 293T 细胞，48⁻⁷2 小时后收集病毒上清。
感染过程：用病毒上清感染对数生长期的 HL-60 细胞，可加入聚凝胺（Polybrene，5-10 µg/mL）增强感染效率。
筛选与克隆化：感染后 48 小时更换含嘌呤霉素（通常 1-2 µg/mL）的培养基，未成功转染的细胞死亡，存活细胞通过有限稀释法或流式细胞术分选，获得单克隆稳转株。
二、应用领域
1. 细胞生物学研究
实时追踪：利用 GFP 荧光（激发 / 发射波长约 488/509 nm），通过荧光显微镜或流式细胞术观察 HL-60 细胞的增殖、凋亡、分化及药物处理后的动态变化。
例：研究维甲酸诱导 HL-60 细胞向粒细胞分化过程中，GFP 标记的细胞形态与荧光强度的关联。
细胞周期分析：结合 PI（碘化丙啶）染色，通过流式细胞术分析 GFP⁺细胞的周期分布，评估药物对细胞周期的影响。
2. 肿瘤与免疫研究
荷瘤模型构建：将 HL-60-GFP-Puro 细胞接种至免疫缺陷小鼠（如 NOD/SCID 小鼠），通过活体荧光成像监测肿瘤生长、转移及药物疗效。
例：观察化疗药物对皮下移植瘤中 GFP 标记细胞的清除效果，评估药物抗肿瘤活性。
免疫细胞杀伤实验：与 T 细胞、NK 细胞共培养，利用 GFP 荧光定量检测免疫细胞对 HL-60 细胞的杀伤效率（如流式细胞术检测 GFP⁺细胞比例下降）。
3. 药物筛选与机制研究
高通量筛选：基于 GFP 荧光强度变化（反映细胞数量或活性），快速评估化合物对 HL-60 细胞的增殖抑制或促凋亡作用。
信号通路研究：结合 GFP 融合蛋白（如 GFP - 细胞骨架蛋白），观察药物处理后细胞内结构或信号分子的定位变化。
三、保存与维护
1. 细胞冻存
冻存条件：
细胞密度：对数生长期（密度约 1×106-3×106cells/mL）。
冻存液：90% 胎牛血清（FBS）+10% DMSO，或专用细胞冻存液（如无血清冻存液）。
程序降温：
传统方法：-80℃冰箱过夜后转入液氮；
梯度降温盒：直接放入 - 80℃，次日转液氮。
2. 细胞复苏与传代
复苏：冻存管 37℃水浴快速解冻（＜1 分钟），加入含 10% FBS 的 RPMI 1640 培养基稀释，离心（800-1000 rpm，5 分钟）去除 DMSO，换液后置于 37℃、5%CO2 培养箱。
传代：
悬浮细胞特性：HL-60 为悬浮生长，当密度达1×105-1×106 cells/mL时，按 1:3-1:5 比例传代，避免密度过高导致凋亡。
抗性维持：常规培养需持续添加嘌呤霉素（0.5-1 µg/mL），若短期实验需排除药物干扰，可提前 24 小时更换无药培养基。
3. 质量控制
荧光检测：定期通过荧光显微镜或流式细胞术确认 GFP 阳性率（应＞95%），若表达率下降，需重新筛选或补充抗性压力。
污染监测：每周镜检观察细胞形态及培养基澄清度，定期用支原体检测试剂盒（如 PCR 法）检测污染。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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