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Jurkat-RFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:48:49
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详细内容
Jurkat-RFP-Puro稳转株
英文名称 | Jurkat-RFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H1118 |
中文名称 | RFP 标记的 Jurkat 稳转株 |
Lot number | Jurkat-10A2P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 淋巴母细胞样 |
生长特性 | 悬浮生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | RPMI-1640＋10%FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
细胞背景
Jurkat 细胞特性：Jurkat 细胞是来源于人急性 T 淋巴细胞白血病（T - ALL）的永生细胞系，为悬浮细胞，具有 T 细胞特性，在免疫学、细胞信号传导、癌症研究等领域应用广泛。它是 20 世纪 70 年代末从一名 14 岁 T 细胞白血病男孩的外周血中分离建立的，目前已有多种 Jurkat 衍生细胞系可从细胞培养库获取，用于不同研究需求。
应用场景：该细胞株在 T 细胞相关的免疫机制、肿瘤研究以及基因功能探索等方面具有重要作用，例如可用于观察 T 细胞在免疫反应中的动态变化、筛选影响 T 细胞功能的药物等。
构建过程
载体构建：通常选用慢病毒载体或逆转录病毒载体，将 RFP 基因和 Puro 抗性基因插入载体中。RFP 基因用于后续的荧光标记观察，Puro 抗性基因则作为筛选标记，使成功转染的细胞能够在含有嘌呤霉素的培养基中存活。
细胞转染与筛选：通过病毒介导的基因转移方法，将构建好的载体导入 Jurkat 细胞。然后利用含有嘌呤霉素的培养基进行筛选，只有那些成功整合了载体并表达 Puro 抗性蛋白的细胞才能存活下来，这些细胞即为初步获得的 Jurkat - RFP - Puro 稳转株。为了获得更均一的细胞群体，可能还会采用有限稀释法或流式细胞分选等技术进行单克隆化培养，得到单个细胞衍生的纯细胞株。
应用领域
细胞示踪与成像：在体外实验中，借助 RFP 的红色荧光，可通过荧光显微镜实时观测细胞的增殖、凋亡、迁移等过程，例如研究 T 细胞在受到刺激后的形态改变和运动轨迹。在体内实验中，将细胞接种到免疫缺陷小鼠等动物模型中，利用活体成像系统可以追踪肿瘤细胞的生长、转移以及免疫细胞之间的相互作用，比如观察 Jurkat 细胞在荷瘤小鼠体内的分布和侵袭情况。
药物筛选与毒性评估：在药物研发中，可用于高通量筛选针对 T 细胞白血病的化疗药物或小分子抑制剂。通过检测 RFP 荧光强度的变化或者结合细胞存活率检测方法（如 CCK - 8 法），快速评估药物对 Jurkat 细胞的抑制效果和毒性作用。例如，将不同浓度的药物作用于稳转株细胞，观察荧光信号的减弱程度以及细胞的存活情况，以确定药物的半数抑制浓度（IC50）等参数。
基因功能与信号通路研究：可以将目的基因与 RFP 融合表达，通过荧光共定位分析来研究目的蛋白在细胞内的表达与亚细胞定位。此外，还可结合 RFP 标记的报告基因，如构建 RFP 标记的 NF - κB 通路荧光探针，动态监测 T 细胞中相关信号通路的激活情况，了解细胞在免疫应答或疾病发生过程中的分子机制。
培养与维护
基础培养条件：一般使用含 10% 胎牛血清（FBS）的 RPMI 1640 培养基，并添加 1% 双抗（青霉素 / 链霉素）来防止细菌污染。为了维持细胞对嘌呤霉素的抗性，培养时需添加适量的嘌呤霉素，通常浓度在 0.5 - 2 µg/mL，具体浓度需根据实验情况进行预实验优化，避免浓度过高对细胞产生毒性。培养条件为 37℃、5%CO2 和饱和湿度的培养箱。
传代与密度：Jurkat - RFP - Puro 稳转株为悬浮细胞，传代时建议细胞密度维持在 0.3 - 1×106 cells/mL，当细胞密度过高时，可能会导致营养物质消耗过快、代谢产物积累，从而引起细胞凋亡。传代比例可根据细胞生长情况按 1:3 - 1:5 进行稀释，每 2 - 3 天更换一次培养基，以保持细胞生长环境的稳定。
冻存与复苏：冻存细胞时，使用含有 90% FBS 和 10% DMSO（或专用细胞冻存液）的冻存液，将细胞密度调整为 1 - 5×10⁶ cells/mL。冻存程序一般为将细胞悬液放入程序降温盒中，在 - 80℃冰箱过夜，然后转移至液氮中长期保存。复苏细胞时，应快速将冻存管在 37℃水浴中解冻，离心去除冻存液后，加入含有嘌呤霉素的新鲜培养基进行培养。
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