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CNE2-GFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:48:49
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详细内容
CNE2-GFP-Puro稳转株
英文名称 | CNE2-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H1326 |
中文名称 | GFP 标记的 CNE2 稳转株 |
Lot number | CNE2-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | RPMI-1640 + 10% FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
一、基本背景
1. 亲本细胞系 CNE2
来源：CNE2 是一种人鼻咽癌细胞系，源自低分化鼻咽癌组织，具有较强的增殖和转移能力，是鼻咽癌研究中常用的模型。
特性：贴壁生长，适合体外培养和体内成瘤实验。
2. GFP 与稳转株构建
GFP（绿色荧光蛋白）：作为报告基因，其表达产物可在荧光显微镜下发出绿色荧光，便于实时观察细胞形态、迁移、分化等动态过程，或用于细胞分选（如流式细胞术）。
稳转株构建方法：通过病毒载体（如慢病毒、逆转录病毒）或质粒将 GFP 基因和嘌呤霉素抗性基因（PuroR）导入 CNE2 细胞，经嘌呤霉素筛选后，获得稳定整合外源基因的细胞克隆。
二、关键特性与应用场景
1. 核心特性
特性 描述
荧光标记 组成型表达 GFP，荧光强度稳定，可通过荧光显微镜或流式细胞术检测。
抗生素抗性 携带 Puro 抗性基因，可在含嘌呤霉素的培养基中持续培养，避免非稳转细胞污染。
遗传稳定性 外源基因整合至细胞基因组中，传代培养时不易丢失。
细胞功能 保留 CNE2 细胞的恶性生物学行为（如增殖、侵袭），GFP 表达不影响其基本特性。
2. 主要应用
细胞示踪与成像：
体内实验：将稳转株注射至动物模型（如裸鼠），通过活体荧光成像追踪肿瘤生长、转移路径。
体外实验：观察细胞间相互作用、药物处理后的形态变化等。
药物筛选与毒性评估：
利用嘌呤霉素抗性筛选共转染的目的基因（如耐药基因、突变基因），构建多基因稳转株。
通过 GFP 荧光强度变化间接反映细胞活性（如药物诱导的凋亡导致荧光细胞减少）。
基因功能研究：
作为宿主细胞，用于过表达或敲低目的基因，结合 GFP 标记进行细胞分选，富集阳性克隆。
三、培养与维护要点
1. 培养基与试剂
基础培养基：通常使用 DMEM 或 RPMI 1640 培养基，添加 10% 胎牛血清（FBS）、1% 双抗（青霉素 / 链霉素）。
嘌呤霉素筛选浓度：
筛选阶段：初筛浓度一般为 2-5 µg/mL（需预实验确定最低致死浓度）。
维持阶段：浓度可降至 0.5-1 µg/mL，防止抗性基因丢失。
2. 培养条件
温度与气体：37℃，5%CO2 恒温培养箱。
传代注意事项：
避免过度消化（胰酶处理时间不宜过长），防止细胞状态恶化。
定期检查荧光表达率（建议每 5-10 代通过流式细胞术检测），确保 GFP 阳性细胞比例＞95%。
3. 质量控制
污染检测：定期进行支原体、细菌污染检测（如 PCR 法、试剂盒检测）。
荧光稳定性验证：通过荧光显微镜观察细胞荧光强度均一性，排除克隆异质性。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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