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KARPASS-299-GFP-Puro稳转株
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详细内容
KARPASS-299-GFP-Puro稳转株
英文名称 | KARPASS-299-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H1115 |
中文名称 | GFP 标记的 KARPASS-299 稳转株 |
Lot number | KARPASS-299-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 淋巴母细胞样 |
生长特性 | 悬浮生长 |
细胞株 构建流程 | (1)构建目的基因过表达慢病毒重组质粒,并包装慢病毒; (2)慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞; (3)用最佳浓度药物对细胞株进行筛选,获得混合稳转株; (4)稳转株质检(COA)。 |
完全培养基 | RPMI-1640+10%FBS + 1% P/S(选择添加) |
培养条件 | (1) 气相:95%空气,5% CO2;(2) 温度:37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |

细胞背景
KARPASS - 299 细胞是 1986 年从一名患有 T 细胞非霍奇金淋巴瘤的 25 岁男子的外周血中建立的人 T 细胞淋巴瘤细胞系,现分类为 CD30 + 间变性大细胞淋巴瘤(ALCL),细胞携带 NPM - ALK 融合基因。它具有典型的 T 细胞淋巴瘤细胞的生物学特性,常被用于淋巴瘤的发病机制、治疗靶点探索以及药物研发等方面的研究。
构建过程
一般是通过慢病毒载体系统来构建。将携带 GFP 基因和 Puro 基因的慢病毒载体转染到 KARPASS - 299 细胞中,慢病毒载体的基因组会整合到 KARPASS - 299 细胞的染色体上。然后利用嘌呤霉素进行筛选,只有成功整合了慢病毒载体并表达 Puro 基因的细胞才能在含有嘌呤霉素的培养基中存活,经过筛选和培养,最终得到稳定表达 GFP 的 KARPASS - 299 - GFP - Puro 稳转株。
应用领域
细胞示踪与成像:在体外培养时,可借助 GFP 的荧光特性,利用荧光显微镜等设备方便地观察 KARPASS - 299 细胞的生长、分裂、迁移等行为。将其接种到动物模型中后,也可通过检测 GFP 荧光来追踪 KARPASS - 299 细胞在体内的分布、转移以及与宿主组织的相互作用等,例如研究淋巴瘤细胞在小鼠体内的肿瘤形成过程和转移规律。
药物研发与筛选:可用于高通量药物筛选实验。通过观察药物处理后 KARPASS - 299 - GFP - Puro 细胞的荧光强度变化、细胞形态改变以及细胞生长抑制情况等,来评估药物对 KARPASS - 299 细胞的作用效果,快速筛选出对 T 细胞淋巴瘤具有潜在治疗作用的药物。同时,还能通过观察 GFP 标记的特定蛋白在细胞内的定位变化,来研究药物的作用机制,揭示药物对细胞信号通路和生物学功能的影响。
基因功能与信号通路研究:可以将特定的基因与 GFP 融合表达,或者利用 RNA 干扰技术结合 GFP 报告基因,在 KARPASS - 299 - GFP - Puro 稳转株中研究相关基因的功能以及信号通路的调控机制。例如,通过干扰某个基因的表达,观察细胞的 GFP 荧光变化以及相关表型的改变,进而推断该基因在 KARPASS - 299 细胞中的作用和参与的信号通路。
培养与维护
培养条件:通常使用含有 20% 胎牛血清(FBS)的 RPMI 1640 培养基,并添加 2mM 谷氨酰胺,在 37℃、5%CO2 的培养箱中培养。如果希望细胞生长速度慢一些,也可使用含有 10% 或 5% FBS 的培养基。
传代与筛选:当细胞密度达到一定程度(通常维持细胞浓度在 0.5 - 2×106 cells/ml)时,进行传代培养,一般每 2 - 3 天按 1:3 的比例对饱和培养物进行传代。在传代过程中,需要持续使用含有嘌呤霉素的培养基进行筛选,以维持细胞对嘌呤霉素的抗性和 GFP 的稳定表达,确保稳转株的特性不丢失。
细胞冻存:为了长期保存细胞株,需要将细胞冻存。冻存液通常由 90% FBS 和 10% DMSO 组成,将细胞悬液分装到冻存管中,按照程序降温后,置于 - 80℃冰箱或液氮中保存。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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