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THP-1-RFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/15 11:08:30
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详细内容
THP-1-RFP-Puro稳转株
产品名称 | THP-1-RFP-Puro 稳转细胞株 |
产品货号 | XY-H1126 |
中文名称 | RFP 标记的 THP-1 稳转细胞株 |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 淋巴母细胞样 |
生长特性 | 悬浮生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转细胞株； （4）稳转细胞株质检（COA）。 |
完全培养基 | RPMI-1640 + 10% FBS + 0.05mM β-巯基乙醇 |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
共享方式 | 公益性共享 |
一、基本概念
1. 背景与来源
THP-1 细胞：源自人急性单核细胞白血病细胞系，具有单核细胞的特性，可诱导分化为巨噬细胞或树突状细胞，是免疫、炎症、肿瘤等研究领域的常用细胞模型。
稳转株构建：通过基因转染技术将外源基因（如荧光蛋白基因、抗性基因等）稳定整合到 THP-1 细胞的基因组中，经筛选后获得能稳定表达目标基因的细胞株。
THP-1-RFP-Puro：
RFP：红色荧光蛋白（Red Fluorescent Protein），作为报告基因，用于实时追踪细胞位置、监测细胞增殖或迁移等动态过程。
Puro：嘌呤霉素（Puromycin）抗性基因，用于筛选成功转染的细胞（未整合抗性基因的细胞会被嘌呤霉素杀死）。
2. 关键特性
稳定表达：外源基因随细胞分裂稳定遗传，避免瞬时转染的表达时效性问题。
荧光标记：RFP 的表达可通过荧光显微镜、流式细胞术等手段直观检测，便于细胞示踪或分选。
抗性筛选：利用嘌呤霉素抗性基因，可在培养过程中维持稳转株的纯合性。
二、构建流程
载体设计：构建包含 RFP 基因和 Puro 抗性基因的质粒载体（如慢病毒载体、逆转录病毒载体等）。
细胞转染：通过病毒感染（常用慢病毒）或化学转染方法将载体导入 THP-1 细胞。
抗性筛选：在培养基中添加嘌呤霉素，未成功转染的细胞死亡，存活细胞形成稳转克隆。
单克隆挑选：通过有限稀释法或流式细胞术筛选单克隆细胞，验证 RFP 表达的稳定性和均一性。
功能鉴定：检测细胞形态、增殖能力、诱导分化能力等是否受外源基因影响。
三、应用场景
1. 细胞示踪与成像
在体内外研究中，利用 RFP 荧光信号追踪 THP-1 细胞的迁移（如向炎症部位的趋化）、侵袭或与其他细胞的相互作用。
示例：将 THP-1-RFP-Puro 细胞注射到实验动物体内，通过活体成像观察免疫细胞在肿瘤微环境中的分布。
2. 药物筛选与毒性评估
作为模型细胞，用于评估药物对单核 / 巨噬细胞功能的影响（如吞噬能力、细胞因子分泌），RFP 可辅助监测细胞活性或凋亡。
结合嘌呤霉素筛选，可在药物处理后快速富集存活的稳转细胞，简化实验流程。
3. 基因功能研究
若在 RFP 载体中同时插入目的基因（如敲除 / 过表达载体），可构建多标记稳转株，同步研究基因功能与细胞行为。
例如：探究某炎症相关基因表达对 THP-1 细胞分化为巨噬细胞的影响，通过 RFP 荧光强度评估转染效率。
4. 共培养体系研究
与其他细胞（如肿瘤细胞、成纤维细胞）共培养时，RFP 可区分 THP-1 细胞与其他无荧光标记的细胞，便于分析细胞间通讯或免疫应答。
四、培养与维护要点
培养基：常用 RPMI 1640 培养基，添加 10% 胎牛血清（FBS）、1% 双抗（青霉素 / 链霉素），并根据需要维持嘌呤霉素浓度（通常为 1-2 µg/mL）。
培养条件：37℃、5%CO2 ，悬浮培养（THP-1 为悬浮细胞），定期传代避免细胞密度过高（建议密度维持在1×105-1×106 cells/mL）。
荧光稳定性：长期培养时需定期检测 RFP 表达强度，避免因传代次数过多导致基因沉默或丢失。
污染控制：嘌呤霉素对细菌、真菌无抑制作用，需严格无菌操作，避免微生物污染。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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