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HuH7-GFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:48:49
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详细内容
HuH7-GFP-Puro稳转株
英文名称 | HuH7-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H1150 |
中文名称 | GFP 标记的 HuH7 稳转株 |
Lot number | HuH7-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | DMEM-H + 10% FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
HuH7-GFP-Puro 稳转株概述
HuH7 细胞是一种人肝癌细胞系，来源于成人肝细胞癌组织，具有肝癌细胞的典型生物学特性，常用于肝癌相关研究（如病毒感染、基因表达、药物筛选等）。
GFP（绿色荧光蛋白） 作为报告基因，可通过荧光显微镜直接观察细胞内表达情况，便于追踪细胞、监测基因表达或蛋白定位。
Puro（嘌呤霉素）是一种抗生素，用于筛选成功转染的细胞 —— 稳转株需通过嘌呤霉素抗性基因筛选，未成功整合目的基因的细胞会被杀死，存活细胞即为稳定表达 GFP 的细胞株。
构建流程（简要）
载体构建：将 GFP 基因与嘌呤霉素抗性基因（如 Puro 抗性基因）插入质粒载体，形成重组质粒（如 pLVX-GFP-Puro）。
细胞转染：通过病毒感染（如慢病毒或逆转录病毒）或化学转染法将重组质粒导入 HuH7 细胞。
筛选与扩增：使用嘌呤霉素（浓度需预实验优化，通常 5-10 µg/mL）处理细胞，存活细胞为稳定整合目的基因的单克隆或多克隆稳转株。
鉴定验证：
荧光显微镜观察 GFP 表达强度及细胞分布。
流式细胞术检测 GFP 阳性率（通常需＞95% 纯度）。
Western blot 验证 GFP 蛋白表达水平。
培养与维护要点
培养基：常用 DMEM 培养基，添加 10% 胎牛血清（FBS）、1% 双抗（青霉素 / 链霉素），维持 pH 7.2⁻⁷.4。
嘌呤霉素维持：构建成功后，可将嘌呤霉素浓度降至 2-5 µg/mL（根据细胞耐受性调整），避免长期高浓度导致细胞毒性。
传代与冻存：
贴壁密度达 80%-90% 时传代，胰酶消化时间不宜过长（避免细胞损伤）。
冻存液建议使用 90% FBS+10% DMSO，液氮保存，避免反复冻融影响荧光表达稳定性。
应用案例
肿瘤细胞迁移研究：通过 GFP 荧光追踪 HuH7 细胞在 Transwell 小室或体内模型中的迁移能力。
药物靶向效率评估：将 GFP 作为报告基因，结合荧光成像检测纳米药物对肝癌细胞的递送效率。
基因编辑验证：与 CRISPR-Cas9 系统联用，通过 GFP 共表达筛选成功编辑的细胞克隆。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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