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Huh7-eGFP-Puro稳转株

价格:¥ 电议

品牌名称:$brandModel.Title型号: 原产地:中国大陆 更新时间:2026/10/19 10:48:49

产品摘要:Huh7-eGFP-Puro稳转株是一种人肝癌细胞系,常用于肝病、病毒感染(如乙型肝炎、丙型肝炎)及肿瘤相关研究。稳转株(稳定转染细胞株)是指通过基因工程手段将外源基因稳定整合到细胞基因组中,并能在传代过程中持续表达的细胞株。

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旗舰版网址:http://www.xybio-sh.com

详细内容

Huh7-eGFP-Puro稳转株

英文名称

Huh7-eGFP-Puro polyclonal stable cell line

产品货号

XY-H1152

中文名称

eGFP 标记的 Huh7 稳转株

Lot number

Huh7-51J7P

细胞规格

复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞

细胞形态

上皮细胞样

生长特性

贴壁生长

细胞株

构建流程

(1)构建目的基因过表达慢病毒重组质粒,并包装慢病毒;

(2)慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞;

(3)用最佳浓度药物对细胞株进行筛选,获得混合稳转株;

(4)稳转株质检(COA)。

完全培养基

DMEM + 10% FBS + 1% P/S(选择添加)

培养条件

(1) 气相:95%空气,5% CO2;(2) 温度:37 ℃。

细胞冻存

无血清冻存液

存储条件

液氮

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Huh7-eGFP-Puro 稳转株概述

Huh7 细胞是一种人肝癌细胞系,常用于肝病、病毒感染(如乙型肝炎、丙型肝炎)及肿瘤相关研究。稳转株(稳定转染细胞株)是指通过基因工程手段将外源基因稳定整合到细胞基因组中,并能在传代过程中持续表达的细胞株。

关键元素解析:

eGFP(增强型绿色荧光蛋白)

作为报告基因,表达后可发出绿色荧光,便于通过荧光显微镜、流式细胞术等实时监测细胞状态、基因表达位置或细胞追踪。

优势:荧光强度高、稳定性好,对细胞毒性低,广泛用于细胞成像和筛选。

Puro(嘌呤霉素)

作为筛选标记,赋予细胞对嘌呤霉素的抗性。在稳转株构建过程中,未成功整合外源基因的细胞会被嘌呤霉素杀死,存活细胞即为稳定转染的阳性克隆。

构建流程与技术要点

1. 载体构建

构建含 eGFP 基因 和 Puro 抗性基因 的重组质粒(如慢病毒载体、质粒载体),通常通过限制性内切酶酶切、连接反应完成。

示例载体结构:

plaintext

[启动子] → eGFP基因 → [终止子]

[启动子] → Puro抗性基因 → [终止子]

2. 细胞转染 / 感染

化学转染:利用脂质体、PEI 等将质粒导入 Huh7 细胞(适用于贴壁细胞)。

病毒感染:若使用慢病毒或逆转录病毒载体,需先包装病毒颗粒,再感染 Huh7 细胞(效率更高,适用于难转染细胞)。

3. 嘌呤霉素筛选

转染 / 感染后 48⁻⁷2 小时,加入嘌呤霉素(浓度需预实验优化,通常为 0.5-2 µg/mL)进行筛选,未整合抗性基因的细胞逐渐死亡,约 1-2 周后获得稳定克隆。

4. 单克隆挑选与鉴定

通过有限稀释法或流式细胞术分选单克隆细胞,扩大培养后:

荧光检测:显微镜下观察绿色荧光表达是否均匀。

Western blot/PCR:验证 eGFP 基因的蛋白或 mRNA 表达水平。

抗性验证:撤去嘌呤霉素后,确认抗性基因稳定遗传。

应用场景

基因表达研究

追踪外源基因在 Huh7 细胞中的定位和动态表达(如病毒蛋白与宿主互作研究)。

药物筛选与毒性分析

利用荧光强度变化评估药物对细胞活性的影响(如肝癌靶向药物筛选)。

细胞示踪与移植研究

标记 Huh7 细胞后移植到动物模型中,通过荧光成像观察肿瘤生长、转移过程。

信号通路研究

结合 eGFP 融合蛋白,分析特定信号分子在细胞内的分布和激活状态。

仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。

以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。


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