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详细内容
Huh7-eGFP-Puro稳转株
英文名称 | Huh7-eGFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H1152 |
中文名称 | eGFP 标记的 Huh7 稳转株 |
Lot number | Huh7-51J7P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | (1)构建目的基因过表达慢病毒重组质粒,并包装慢病毒; (2)慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞; (3)用最佳浓度药物对细胞株进行筛选,获得混合稳转株; (4)稳转株质检(COA)。 |
完全培养基 | DMEM + 10% FBS + 1% P/S(选择添加) |
培养条件 | (1) 气相:95%空气,5% CO2;(2) 温度:37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |

Huh7-eGFP-Puro 稳转株概述
Huh7 细胞是一种人肝癌细胞系,常用于肝病、病毒感染(如乙型肝炎、丙型肝炎)及肿瘤相关研究。稳转株(稳定转染细胞株)是指通过基因工程手段将外源基因稳定整合到细胞基因组中,并能在传代过程中持续表达的细胞株。
关键元素解析:
eGFP(增强型绿色荧光蛋白)
作为报告基因,表达后可发出绿色荧光,便于通过荧光显微镜、流式细胞术等实时监测细胞状态、基因表达位置或细胞追踪。
优势:荧光强度高、稳定性好,对细胞毒性低,广泛用于细胞成像和筛选。
Puro(嘌呤霉素)
作为筛选标记,赋予细胞对嘌呤霉素的抗性。在稳转株构建过程中,未成功整合外源基因的细胞会被嘌呤霉素杀死,存活细胞即为稳定转染的阳性克隆。
构建流程与技术要点
1. 载体构建
构建含 eGFP 基因 和 Puro 抗性基因 的重组质粒(如慢病毒载体、质粒载体),通常通过限制性内切酶酶切、连接反应完成。
示例载体结构:
plaintext
[启动子] → eGFP基因 → [终止子]
[启动子] → Puro抗性基因 → [终止子]
2. 细胞转染 / 感染
化学转染:利用脂质体、PEI 等将质粒导入 Huh7 细胞(适用于贴壁细胞)。
病毒感染:若使用慢病毒或逆转录病毒载体,需先包装病毒颗粒,再感染 Huh7 细胞(效率更高,适用于难转染细胞)。
3. 嘌呤霉素筛选
转染 / 感染后 48⁻⁷2 小时,加入嘌呤霉素(浓度需预实验优化,通常为 0.5-2 µg/mL)进行筛选,未整合抗性基因的细胞逐渐死亡,约 1-2 周后获得稳定克隆。
4. 单克隆挑选与鉴定
通过有限稀释法或流式细胞术分选单克隆细胞,扩大培养后:
荧光检测:显微镜下观察绿色荧光表达是否均匀。
Western blot/PCR:验证 eGFP 基因的蛋白或 mRNA 表达水平。
抗性验证:撤去嘌呤霉素后,确认抗性基因稳定遗传。
应用场景
基因表达研究
追踪外源基因在 Huh7 细胞中的定位和动态表达(如病毒蛋白与宿主互作研究)。
药物筛选与毒性分析
利用荧光强度变化评估药物对细胞活性的影响(如肝癌靶向药物筛选)。
细胞示踪与移植研究
标记 Huh7 细胞后移植到动物模型中,通过荧光成像观察肿瘤生长、转移过程。
信号通路研究
结合 eGFP 融合蛋白,分析特定信号分子在细胞内的分布和激活状态。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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