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Caski-GFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/15 11:08:30
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详细内容
Caski-GFP-Puro稳转株
英文名称 | Caski-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H1177 |
中文名称 | GFP 标记的 Caski 稳转株 |
Lot number | Caski-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | RPMI-1640 + 10% FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
1. 细胞背景与特性
来源：Caski 细胞分离自人宫颈癌上皮细胞，含有 HPV-16 和 HPV-18 相关序列，可产生 hCGβ 亚单位和肿瘤相关抗原。
标记特性：GFP 的持续表达使细胞在荧光显微镜下呈现绿色荧光，便于实时追踪细胞动态（如迁移、侵袭）；嘌呤霉素抗性基因（Puro）允许通过嘌呤霉素筛选获得稳定转染的细胞克隆。
2. 构建方法
慢病毒载体系统：
载体设计：常用含 GFP 和 Puro 抗性基因的慢病毒载体（如 pLKO.1-EGFP-puro 或 pCDH-CMV-MCS-EF1-LUC-Puro），通过 U6 启动子驱动 GFP 表达。
病毒包装：将载体与包装质粒共转染 293 细胞，收集并浓缩慢病毒颗粒。
感染与筛选：
以适宜 MOI（感染复数）感染 Caski 细胞，24-48 小时后更换含嘌呤霉素的培养基（通常浓度为 1-10 µg/mL，需预实验优化）。
持续筛选 2-3 周，直至未转染细胞死亡，存活细胞即为稳定表达 GFP 的单克隆株。
验证：通过荧光显微镜观察 GFP 表达效率，结合 WB 或 ELISA 检测目的蛋白水平。
3. 应用领域
肿瘤研究：
细胞动态追踪：利用 GFP 荧光实时观察 Caski 细胞在体内外的迁移、侵袭及药物响应。
信号通路解析：标记特定蛋白（如癌基因或抑癌蛋白），研究其在肿瘤微环境中的定位与功能。
药物筛选：
基于嘌呤霉素抗性的筛选压力，可评估化疗药物对稳转株的杀伤效果，或筛选靶向 HPV 相关通路的抑制剂。
基因功能研究：
结合 RNAi 或 CRISPR 技术，构建 GFP 标记的基因敲低 / 敲除稳转株，分析基因在宫颈癌发生中的作用。
4. 获取途径
商业购买：
部分公司提供类似的双标记稳转株（如 Hela-LUC-GFP-Puro），可咨询定制服务。例如，上海澳音生物科技有限公司提供多种荧光标记细胞株（如 SAc0142LG）。
镜像绮点（上海）细胞技术有限公司提供 Caski 细胞（¥1500/1×106个），可在此基础上自行构建稳转株。
自主构建：
参考慢病毒转染流程（如病毒感染→嘌呤霉素筛选→单克隆扩增），结合 Caski 细胞的培养特性（RPMI-1640 培养基 + 10% 胎牛血清）进行操作。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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