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HEK-293T-GFP-Puro稳转株
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详细内容
HEK-293T-GFP-Puro稳转株
产品名称 | HEK-293T-GFP-Puro 稳转细胞株 |
产品货号 | XY-H1209 |
中文名称 | GFP 标记的 HEK-293T 稳转细胞株 |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | (1)构建目的基因过表达慢病毒重组质粒,并包装慢病毒; (2)慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞; (3)用最佳浓度药物对细胞株进行筛选,获得混合稳转细胞株; (4)稳转细胞株质检(COA)。 |
完全培养基 | DMEM-H + 10% FBS + 1% P/S(选择添加) |
培养条件 | (1) 气相:95%空气,5% CO2;(2) 温度:37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
共享方式 | 公益性共享 |

HEK-293T-GFP-Puro 稳转株概述
HEK-293T 细胞是一种常用的人胚肾细胞系,源于 293 细胞(人肾上皮细胞)的突变株,因其高转染效率和蛋白表达能力,广泛应用于病毒包装、基因编辑、蛋白生产等生物医学研究。
GFP(绿色荧光蛋白)*作为报告基因,常用于标记细胞或蛋白,便于通过荧光显微镜观察细胞状态、定位或筛选阳性克隆。
Puro(嘌呤霉素) 是一种抗生素,用于稳转株的筛选 —— 通过质粒载体将带有嘌呤霉素抗性基因的目标基因导入细胞后,未成功整合基因的细胞会被嘌呤霉素杀死,存活细胞即为稳定表达目标基因(如 GFP)的稳转株。
HEK-293T-GFP-Puro 稳转株的构建流程
载体构建
构建含 GFP 基因和嘌呤霉素抗性基因的质粒载体(如 pLVX-GFP-Puro)。
载体需包含启动子(如 CMV)驱动 GFP 表达,并通过 IRES 或双顺反子结构连接抗性基因,确保两者共表达。
细胞转染 / 感染
瞬时转染:利用脂质体(如 Lipofectamine 2000)或电穿孔法将质粒导入 HEK-293T 细胞。
病毒感染(若使用慢病毒载体):
先通过三质粒系统(包装质粒、包膜质粒、目的质粒)在 293T 细胞中包装慢病毒。
收集病毒上清液,感染目标 293T 细胞,通过病毒将 GFP 和抗性基因整合到细胞基因组中。
嘌呤霉素筛选
转染 / 感染 48 小时后,更换含嘌呤霉素的培养基(浓度需预实验优化,通常为 1-5 µg/mL)。
未成功整合抗性基因的细胞逐渐死亡,存活细胞经 2-3 周筛选后,形成稳定表达 GFP 的单克隆或混合稳转株。
鉴定与扩增
荧光检测:通过荧光显微镜或流式细胞术(FACS)验证 GFP 表达效率(阳性率应接近 100%)。
单克隆化:通过有限稀释法或流式分选获得单细胞克隆,确保遗传稳定性。
扩大培养并冻存,建立稳转株细胞库。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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