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CV1-GFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/15 11:08:30
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详细内容
CV1-GFP-Puro稳转株
英文名称 | CV1-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H1212 |
中文名称 | GFP 标记的 CV1 稳转株 |
Lot number | CV1-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 成纤维细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | RPMI-1640 + 10% FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
CV1-GFP-Puro 稳转株概述
CV1 细胞是一种源自非洲绿猴肾细胞的永生化细胞系，常用于病毒学研究、基因表达分析等领域。GFP（绿色荧光蛋白）作为报告基因，便于通过荧光显微镜直接观察细胞内基因表达情况。Puro（嘌呤霉素） 是一种抗生素，用于筛选成功整合外源基因的稳转细胞株。因此，CV1-GFP-Puro 稳转株是指通过基因工程手段，将携带 GFP 基因且含有 Puro 抗性基因的表达载体稳定转入 CV1 细胞后，经嘌呤霉素筛选获得的稳定表达 GFP 的细胞株。
构建流程与关键技术
载体构建
设计包含 GFP 编码序列和 Puro 抗性基因的重组质粒（如 pEGFP-Puro 载体），通常带有真核生物启动子（如 CMV 启动子）以驱动基因表达。
通过限制性内切酶酶切和 DNA 连接酶连接，将目的基因与载体骨架连接。
细胞转染
使用脂质体转染、电穿孔或病毒介导（如慢病毒）等方法，将重组质粒导入 CV1 细胞。
病毒介导的转染效率较高，适用于难转染的细胞类型。
稳转株筛选
转染后 48⁻⁷2 小时，向培养基中添加嘌呤霉素（浓度需预先通过杀稻瘟菌素敏感实验确定），未成功整合质粒的细胞会因缺乏 Puro 抗性而死亡，存活细胞即为稳定整合目的基因的单克隆或多克隆细胞株。
单克隆化与鉴定
通过有限稀释法或流式细胞分选（FACS）获得单细胞克隆，确保细胞株遗传背景均一。
利用荧光显微镜观察 GFP 表达强度，通过 Western blot 检测 GFP 蛋白水平，或通过基因组 PCR 验证外源基因整合。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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