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DLD-1-GFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:48:49
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详细内容
DLD-1-GFP-Puro稳转株
英文名称 | DLD-1-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H1335 |
中文名称 | GFP 标记的 DLD-1 稳转株 |
Lot number | DLD-1-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | RPMI-1640 + 10% FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
DLD-1-GFP-Puro 稳转株概述
DLD-1 细胞是一种源自人类结直肠腺癌的永生化细胞系，具有典型的上皮细胞形态，常用于肿瘤生物学、药物筛选等研究。
**GFP（绿色荧光蛋白）** 作为报告基因，可通过荧光显微镜直接观察细胞表达情况，用于示踪细胞、监测转染效率或蛋白定位。
**Puro（嘌呤霉素）** 是一种抗生素，用于筛选成功整合外源基因的稳转细胞株 —— 未导入含嘌呤霉素抗性基因载体的细胞会被杀死，存活细胞即为稳定表达目标基因的稳转株。
构建流程（典型步骤）
载体构建
将 GFP 基因与嘌呤霉素抗性基因（如puroR）插入到合适的表达载体（如慢病毒载体、质粒）中，形成重组载体。
载体需包含启动子（如 CMV）驱动 GFP 表达，并确保抗性基因与目标基因共表达。
细胞转染 / 感染
化学转染：利用脂质体或电穿孔法将重组质粒导入 DLD-1 细胞。
病毒感染：若使用慢病毒 / 逆转录病毒载体，需先包装病毒颗粒，再感染细胞（适用于难转染的细胞类型）。
嘌呤霉素筛选
转染 / 感染后 48⁻⁷2 小时，加入嘌呤霉素（浓度需预实验优化，通常为 1-10 µg/mL）进行筛选。
未成功整合载体的细胞逐渐死亡，存活细胞继续培养至形成单克隆，即为稳转株。
单克隆鉴定
通过有限稀释法或流式细胞术（FACS）分离单克隆细胞。
利用荧光显微镜检测 GFP 表达强度，通过 Western blot 验证 GFP 蛋白水平，确保稳转株均一性。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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