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U266-GFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:48:49
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详细内容
U266-GFP-Puro稳转株
英文名称 | U266B1-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H1370 |
中文名称 | GFP 标记的 U266B1 稳转株 |
Lot number | U266B1-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 淋巴母细胞样 |
生长特性 | 悬浮生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | RPMI-1640 + 15％ FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
U266-GFP-Puro 稳转株概述
U266 细胞是一种人多发性骨髓瘤细胞系，常用于血液肿瘤、癌症生物学等领域的研究。**GFP（绿色荧光蛋白）** 是常用的报告基因，通过基因编辑技术将 GFP 基因稳定整合到细胞基因组中，可使细胞表达绿色荧光，便于通过荧光显微镜或流式细胞术等手段进行可视化追踪、分选或功能研究。**Puro（嘌呤霉素）** 是一种抗生素，常用于稳转株的筛选 —— 通过将携带嘌呤霉素抗性基因的载体导入细胞，未成功整合目的基因的细胞会被嘌呤霉素杀死，而成功整合的稳转株则能存活并稳定表达目标蛋白（如 GFP）。
关键特性与应用
1. 特性
荧光标记：稳定表达 GFP，细胞在荧光激发下发出绿色荧光，适用于实时观察细胞形态、迁移、增殖或与其他分子的相互作用。
抗性筛选：携带嘌呤霉素抗性基因，可通过添加嘌呤霉素维持细胞系的稳定性，防止目的基因丢失。
细胞来源：源自人多发性骨髓瘤，保留该肿瘤细胞的生物学特性（如异常增殖、免疫表型等），适合研究骨髓瘤的发病机制、药物敏感性等。
2. 应用场景
细胞成像与追踪：通过荧光显微镜观察细胞在体外或体内（如动物模型）的分布、迁移及动态变化。
流式细胞术（FACS）：利用 GFP 荧光强度分选细胞亚群，或分析细胞周期、凋亡等指标。
药物筛选：结合嘌呤霉素抗性，用于评估药物对稳转株的抑制效果，或筛选能干扰 GFP 表达的化合物。
基因功能研究：作为载体工具，用于研究外源基因（如与 GFP 融合的目的蛋白）在骨髓瘤细胞中的功能。
构建与维护要点
1. 构建流程
载体设计：构建含 GFP 基因和嘌呤霉素抗性基因的质粒载体（如慢病毒载体、逆转录病毒载体）。
细胞转染：通过病毒感染或化学转染法将载体导入 U266 细胞。
抗性筛选：使用嘌呤霉素（通常浓度为 0.5–2 µg/mL，需预实验优化）处理细胞，存活细胞即为稳转株。
单克隆化：通过有限稀释法或流式分选获得单细胞克隆，确保 GFP 表达均一性。
鉴定验证：通过荧光显微镜、Western blot 或流式细胞术检测 GFP 表达水平及稳定性。
2. 培养与维护
培养基：通常使用 RPMI 1640 培养基，添加 10% 胎牛血清（FBS）、1% 双抗（青霉素 / 链霉素），并维持嘌呤霉素（如 1 µg/mL）以保持抗性。
培养条件：37℃、5%CO2 恒温培养箱，悬浮生长，需定期传代（约 2–3 天）避免细胞密度过高。
冻存与复苏：冻存液建议含 90% FBS+10% DMSO，液氮保存；复苏时快速解冻，避免长时间暴露于室温。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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