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HEp-2-RFP-Puro稳转株
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详细内容
HEp-2-RFP-Puro稳转株
英文名称 | HEp-2-RFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H1403 |
中文名称 | RFP 标记的 HEp-2 稳转株 |
Lot number | HEp-2-10A2P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | (1)构建目的基因过表达慢病毒重组质粒,并包装慢病毒; (2)慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞; (3)用最佳浓度药物对细胞株进行筛选,获得混合稳转株; (4)稳转株质检(COA)。 |
完全培养基 | DMEM-H + 15% FBS + 1% P/S(选择添加) |
培养条件 | (1) 气相:95%空气,5% CO2;(2) 温度:37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |

一、基本概念
HEp-2 细胞:来源于人喉癌上皮细胞,是生物学研究中常用的细胞系,具有无限增殖能力,常用于病毒感染、基因表达、肿瘤生物学等研究领域。
RFP:即红色荧光蛋白(Red Fluorescent Protein),是一种常用的报告基因,可通过荧光显微镜直接观察,用于标记细胞、追踪基因表达或监测细胞内动态过程。
Puro:即嘌呤霉素(Puromycin),是一种抗生素,常用于真核细胞的筛选。在稳转株构建中,携带嘌呤霉素抗性基因的细胞可在含嘌呤霉素的培养基中存活,未成功导入目的基因的细胞则被淘汰。
稳转株:指通过基因工程技术将外源基因稳定整合到细胞基因组中,并能在传代过程中稳定表达目的基因的细胞株。
二、构建流程
载体构建
构建包含RFP 报告基因和 ** 嘌呤霉素抗性基因(Puro 抗性)** 的重组质粒载体,同时插入目的基因(如需研究的特定基因)。
载体需具备真核细胞表达所需的启动子、终止子等元件。
细胞转染
将重组质粒导入 HEp-2 细胞,常用方法包括脂质体转染、电穿孔转染等。
抗生素筛选
转染后的细胞在含有 ** 嘌呤霉素(Puro)** 的培养基中培养,未成功整合抗性基因的细胞死亡,存活细胞为初步筛选的阳性克隆。
单克隆筛选与鉴定
通过有限稀释法或流式细胞术筛选单克隆细胞,确保每个克隆来源于单个细胞。
利用荧光显微镜检测RFP 表达(红色荧光),验证外源基因是否稳定整合;通过 Western blot、qPCR 等技术检测目的基因的表达水平。
稳转株扩增与冻存
筛选出的阳性克隆进一步扩增培养,验证其在传代过程中荧光表达和目的基因表达的稳定性,随后冻存备用。
三、应用场景
细胞示踪与成像研究
RFP 的荧光特性可用于实时追踪 HEp-2 细胞在体内外的迁移、侵袭或分化过程,例如在肿瘤转移模型中标记癌细胞。
基因功能研究
通过稳定表达目的基因(如癌基因、抑癌基因或信号通路相关基因),研究其对 HEp-2 细胞增殖、凋亡、耐药性等表型的影响。
药物筛选与毒性评估
利用稳转株构建特定靶点的筛选模型,评估药物对细胞的作用效果(如抑制荧光蛋白表达或影响目的基因功能)。
病毒感染研究
HEp-2 细胞常用于呼吸道病毒(如腺病毒、鼻病毒)研究,稳转株可用于分析病毒与宿主基因的相互作用。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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