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详细内容
HEL-GFP-Puro稳转株
英文名称 | HEL-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H1394 |
中文名称 | GFP 标记的 HEL 稳转株 |
Lot number | HEL-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 淋巴母细胞样 |
生长特性 | 悬浮生长 |
细胞株 构建流程 | (1)构建目的基因过表达慢病毒重组质粒,并包装慢病毒; (2)慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞; (3)用最佳浓度药物对细胞株进行筛选,获得混合稳转株; (4)稳转株质检(COA)。 |
完全培养基 | RPMI-1640 + 10% FBS + 1% P/S(选择添加) |
培养条件 | (1) 气相:95%空气,5% CO2;(2) 温度:37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |

一、基本定义
细胞背景:
HEL 细胞:来源于人类红白血病细胞系,具有无限增殖能力,常用于血液系统疾病、细胞信号传导等研究。
GFP:绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein),作为报告基因,表达后可发出绿色荧光,便于通过荧光显微镜或流式细胞术观察和追踪细胞。
Puro:嘌呤霉素(Puromycin),是一种抗生素,用于稳转株筛选。携带 Puro 抗性基因的细胞可在含嘌呤霉素的培养基中存活,未成功转染的细胞则被淘汰。
核心特征:
HEL 细胞稳定表达 GFP 蛋白,且含有 Puro 抗性基因,可通过嘌呤霉素筛选维持其稳定性。
二、构建原理与流程
载体构建
构建含有GFP 基因和Puro 抗性基因的重组质粒(如慢病毒载体、逆转录病毒载体等)。
载体需包含启动子(如 CMV 启动子)以驱动 GFP 基因的持续表达。
细胞转染
通过病毒感染(慢病毒 / 逆转录病毒)或化学转染(如脂质体转染)将重组质粒导入 HEL 细胞。
病毒感染效率较高,适用于难转染的细胞类型。
筛选与鉴定
嘌呤霉素筛选:转染后的细胞在含嘌呤霉素的培养基中培养,未整合质粒的细胞死亡,存活细胞即为稳定转染的单克隆或多克隆细胞株。
荧光检测:通过荧光显微镜或流式细胞术检测 GFP 表达水平,验证稳转株的成功构建。
Western blot:进一步从蛋白水平确认 GFP 的稳定表达。
三、应用场景
细胞成像与追踪
利用 GFP 荧光特性,实时观察细胞形态、迁移、分化等动态过程,或在活体动物模型中追踪肿瘤细胞(如荷瘤小鼠)。
药物筛选与毒性分析
通过稳转株评估药物对细胞增殖、凋亡的影响。例如,GFP 表达强度变化可能反映药物对基因表达的调控作用。
基因功能研究
作为工具细胞,用于研究目的基因(如与 GFP 共表达的融合蛋白)的亚细胞定位、相互作用蛋白等。
细胞分选与富集
结合流式细胞术(FACS),通过 GFP 荧光强度分选高表达细胞,获得均一性更好的稳转株亚群。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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