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NB4-GFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:48:49
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详细内容
NB4-GFP-Puro稳转株
英文名称 | NB4-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H1398 |
中文名称 | GFP 标记的 NB4 稳转株 |
Lot number | NB4-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 淋巴母细胞样 |
生长特性 | 悬浮生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | RPMI-1640 + 10% FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
NB4-GFP-Puro 稳转株概述
NB4 细胞是一种人急性早幼粒细胞白血病细胞系，常用于血液肿瘤、细胞分化及凋亡机制研究。**GFP（绿色荧光蛋白）** 作为报告基因，可通过荧光显微镜直观观察细胞表达情况，便于追踪细胞或蛋白定位。Puro（嘌呤霉素）是一种抗生素，用于稳转株筛选 —— 通过质粒或病毒载体将目的基因（如 GFP）导入细胞后，含 Puro 抗性基因的细胞可在嘌呤霉素筛选压力下存活，最终获得稳定表达 GFP 的细胞株（即NB4-GFP-Puro 稳转株）。
构建流程与关键步骤
载体构建
设计含 GFP 编码序列和 Puro 抗性基因的表达载体（如质粒），通常通过分子克隆技术将目的基因插入载体多克隆位点。
示例载体结构：
plaintext
[CMV启动子] - [GFP基因] - [IRES序列] - [Puro抗性基因] - [polyA尾]
IRES（内部核糖体进入位点）：允许同一 mRNA 共表达 GFP 和 Puro 抗性蛋白，确保两者表达的一致性。
细胞转染 / 感染
转染：适用于质粒载体，通过脂质体转染或电穿孔法将载体导入 NB4 细胞。
病毒感染：若使用慢病毒或逆转录病毒载体，需先包装病毒颗粒，再感染 NB4 细胞（适用于难转染的细胞类型）。
嘌呤霉素筛选
转染 / 感染后 48⁻⁷2 小时，加入嘌呤霉素筛选浓度（需预实验确定，通常为 0.5-2 µg/mL），未成功整合抗性基因的细胞死亡，存活细胞形成稳定克隆。
单克隆化：通过有限稀释法或流式细胞分选（FACS）筛选单细胞克隆，确保稳转株的均一性。
鉴定与验证
荧光检测：荧光显微镜观察 GFP 表达强度及细胞分布，确认阳性克隆。
Western blot：检测 GFP 蛋白表达水平，验证基因翻译效率。
稳定性传代验证：连续传代培养 20 代以上，检测 GFP 表达是否持续稳定。
应用场景
细胞示踪与成像
利用 GFP 荧光特性，在活体成像、细胞迁移实验中追踪 NB4 细胞，例如研究白血病细胞在体内的定植或转移机制。
药物筛选与机制研究
通过稳转株建立荧光报告系统，快速评估药物对细胞增殖、凋亡的影响（如荧光强度变化反映细胞活性）。
基因功能研究
结合 RNA 干扰（shRNA）或 CRISPR-Cas9 技术，构建 GFP 标记的基因敲降 / 敲除稳转株，分析目的基因在 NB4 细胞中的功能（如分化调控、信号通路影响）。
细胞分选与纯化
利用流式细胞术（FACS）基于 GFP 荧光强度分选细胞亚群，用于单细胞测序或功能异质性研究。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
热门标签：NB4-GFP-Puro稳转株,GFP,标记的,NB4,稳转株,NB4-GFP-Puro,polyclonal,stable,cell,line
