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TT-GFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:48:49
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详细内容
TT-GFP-Puro稳转株
英文名称 | TT-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H1404 |
中文名称 | GFP 标记的 TT 稳转株 |
Lot number | TT-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | F-12K + 20% FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
一、核心组件解析
TT（Target Tag）
通常为目标基因（或蛋白）的标签序列（如 Flag、HA、Myc 等），用于特异性识别和纯化目标蛋白，便于后续的免疫印迹（WB）、免疫共沉淀（Co-IP）等实验。
示例：若研究某蛋白的亚细胞定位，可在其编码序列中插入 TT 标签，通过抗体标记实现蛋白定位检测。
GFP（绿色荧光蛋白）
作为报告基因，表达后发出绿色荧光，用于实时观察细胞内目标蛋白的表达情况、定位及动态变化（如细胞迁移、分裂过程中的蛋白分布）。
优势：荧光信号直观，可通过荧光显微镜、流式细胞术等技术进行检测，无需额外添加底物。
Puro（嘌呤霉素抗性基因）
作为筛选标记，赋予细胞对嘌呤霉素的抗性。在稳转株构建过程中，未成功整合目的基因的细胞会被嘌呤霉素杀死，从而筛选出稳定表达目标基因的细胞克隆。
二、构建原理与流程
载体构建
将 TT 标签、GFP 编码序列及 Puro 抗性基因插入到合适的载体（如慢病毒载体、逆转录病毒载体）中，形成重组质粒。
关键设计：确保 TT-GFP 与目标基因的阅读框一致，避免移码突变，保证融合蛋白正常表达。
细胞转染 / 感染
通过脂质体转染、电穿孔或病毒感染（如慢病毒）将重组载体导入宿主细胞（如 HEK293T、HeLa 等）。
嘌呤霉素筛选
转染 / 感染后，使用嘌呤霉素处理细胞，未成功整合载体的细胞死亡，存活细胞即为稳定表达 TT-GFP-Puro 的单克隆细胞株。
单克隆筛选与鉴定
通过有限稀释法或流式细胞术分选单克隆细胞，利用荧光显微镜观察 GFP 表达情况，通过 WB 检测 TT 标签验证目标蛋白的稳定表达。
三、应用场景
基因表达与定位研究
通过 GFP 荧光直接观察目标蛋白在细胞内的分布（如细胞质、细胞核或细胞器），结合激光共聚焦显微镜可实现高分辨率成像。
细胞示踪与命运追踪
在动物模型中，将稳转株细胞移植到体内，通过 GFP 荧光追踪细胞在组织中的迁移、增殖及分化过程（如肿瘤细胞转移研究）。
蛋白互作与功能分析
利用 TT 标签进行免疫共沉淀，富集目标蛋白及其互作蛋白，结合质谱分析筛选相互作用分子，解析信号通路或蛋白复合物组成。
药物筛选与毒性评估
稳定表达特定靶点的细胞株可用于高通量药物筛选，通过 GFP 信号强度或细胞存活率（结合 Puro 抗性）评估药物疗效或毒性。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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