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HepG2.2.15-RFP-Puro稳转株
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详细内容
HepG2.2.15-RFP-Puro稳转株
英文名称 | HepG2.2.15-RFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H1401 |
中文名称 | RFP 标记的 HepG2.2.15 稳转株 |
Lot number | HepG2.2.15-10A2P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | (1)构建目的基因过表达慢病毒重组质粒,并包装慢病毒; (2)慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞; (3)用最佳浓度药物对细胞株进行筛选,获得混合稳转株; (4)稳转株质检(COA)。 |
完全培养基 | MEM + 10% FBS + 480 µg/mL G418 + 1% P/S(选择添加) |
培养条件 | (1) 气相:95%空气,5% CO2;(2) 温度:37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |

HepG2.2.15-RFP-Puro 稳转株概述
HepG2.2.15 细胞是一种常用于乙型肝炎病毒(HBV)研究的人肝癌细胞系,由 HepG2 细胞经 HBV 基因组转染后获得,可稳定分泌 HBV 病毒颗粒及相关抗原(如 HBsAg、HBeAg)。HepG2.2.15-RFP-Puro 稳转株则是在此基础上通过基因工程改造构建的细胞株,具有以下关键特征:
一、核心特性
1. 标记基因与筛选标记
RFP(红色荧光蛋白):通过慢病毒感染或质粒转染等方式引入 RFP 基因,使细胞表达红色荧光蛋白,便于通过荧光显微镜或流式细胞术进行实时观察、细胞追踪或纯度筛选。
Puro(嘌呤霉素抗性基因):引入嘌呤霉素抗性基因,使细胞在嘌呤霉素筛选压力下存活,确保外源基因(如 RFP)稳定整合至细胞基因组中,避免传代过程中丢失。
2. HBV 相关研究应用
该细胞株继承了 HepG2.2.15 细胞的 HBV 复制能力,可用于研究 HBV 生命周期、病毒 - 宿主相互作用、抗病毒药物筛选等。
RFP 荧光标记可直观监测细胞状态(如增殖、凋亡或病毒感染对细胞形态的影响),或与其他荧光标记(如 GFP)联合使用,实现多色荧光实验。
3. 稳转株优势
稳定性:外源基因整合至基因组,传代后标记基因和功能基因表达稳定,避免瞬时转染的表达波动问题。
筛选便捷性:通过嘌呤霉素筛选可快速获得纯合稳转细胞群,适用于长期实验(如慢性病毒感染模型)。
二、构建流程(典型方法)
载体构建:
构建含 RFP 基因和 Puro 抗性基因的表达载体(如质粒或慢病毒载体),通常由 CMV 等组成型启动子驱动表达。
转染 / 感染:
通过脂质体转染或慢病毒感染将载体导入 HepG2.2.15 细胞。
筛选与单克隆化:
加入嘌呤霉素(浓度需预实验优化)培养,未成功整合抗性基因的细胞死亡,存活细胞形成稳转克隆。
通过有限稀释法或流式细胞术筛选单克隆细胞,确保 RFP 表达均一性。
鉴定:
荧光显微镜观察 RFP 表达,Western blot 验证蛋白水平,PCR 检测基因整合。
三、应用场景
1. 抗病毒药物研究
利用 RFP 荧光强度评估药物对细胞活性的影响(如细胞毒性筛选),或通过 HBV 抗原(如 HBsAg、HBeAg)分泌水平结合荧光标记分析药物抗病毒效果。
2. 细胞生物学研究
追踪细胞在共培养体系中的迁移或相互作用(如与免疫细胞共培养研究 HBV 免疫逃逸)。
结合时间 - lapse 荧光成像技术,动态观察细胞增殖、凋亡或病毒复制周期。
3. 基因功能研究
作为工具细胞株,进一步转染其他目的基因(如 siRNA、CRISPR 质粒),通过 RFP 和 Puro 双标记实现多基因操作后的筛选与示踪。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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