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T24-GFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:48:49
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详细内容
T24-GFP-Puro稳转株
产品名称 | T24-GFP-Puro 稳转株 |
产品货号 | XY-H1435 |
中文名称 | GFP 标记的 T24 稳转株 |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | DMEM-H + 10% FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
T24-GFP-Puro 稳转株概述
T24 细胞是一种源自人膀胱移行细胞癌的永生化细胞系，常用于膀胱癌相关研究。**GFP（绿色荧光蛋白）** 作为报告基因，可通过荧光显微镜直观观察细胞状态或定位；**Puro（嘌呤霉素）** 则是一种抗生素，用于筛选成功转入外源基因的稳转细胞株。因此，T24-GFP-Puro 稳转株是指通过基因工程技术，将携带 GFP 基因的表达载体稳定转入 T24 细胞，并利用嘌呤霉素筛选获得的能够稳定表达 GFP 的细胞株。
核心特性与应用
1. 核心特性
荧光标记：GFP 表达使细胞在荧光显微镜下发出绿色荧光，便于实时追踪细胞动态、监测转染效率或进行细胞分选（如 FACS）。
遗传稳定性：经嘌呤霉素筛选后，外源基因（GFP）整合到细胞基因组中，可在传代过程中稳定表达，避免瞬时转染的表达时效性问题。
抗性筛选标记：细胞对嘌呤霉素具有抗性，可在培养过程中持续使用该抗生素维持稳转株的纯度，防止未转染细胞过度生长。
2. 主要应用场景
细胞生物学研究：观察细胞形态、迁移、侵袭等行为，或用于细胞示踪（如体内肿瘤模型构建）。
基因功能研究：作为载体搭载目的基因（与 GFP 共表达），分析基因过表达或敲减对 T24 细胞增殖、凋亡等功能的影响。
药物筛选与毒性检测：通过荧光强度变化或细胞存活率评估药物对稳转株的作用，结合嘌呤霉素抗性优化筛选体系。
肿瘤模型构建：将稳转株接种至动物体内（如裸鼠），利用活体成像技术监测肿瘤生长及转移。
构建流程与关键技术
1. 基本流程
载体构建：将 GFP 基因插入含嘌呤霉素抗性基因的质粒载体（如 pLVX-GFP-Puro），确保 GFP 与抗性基因共表达。
细胞转染：通过脂质体转染、病毒感染（如慢病毒）等方法将载体导入 T24 细胞。
抗性筛选：转染后 48⁻⁷2 小时加入嘌呤霉素（浓度需预实验优化，通常为 1-5 µg/mL），未成功整合载体的细胞逐渐死亡，存活细胞形成单克隆稳转株。
克隆鉴定：通过有限稀释法或流式细胞术分选单克隆细胞，利用荧光显微镜、Western blot 等验证 GFP 表达水平及稳定性。
2. 关键技术要点
病毒感染效率：对于难转染的细胞系（如 T24），慢病毒感染通常比脂质体转染效率更高，需注意病毒滴度优化。
嘌呤霉素浓度优化：需设置浓度梯度（如 0、0.5、1、2 µg/mL）确定最低致死浓度，避免浓度过低导致筛选失败或过高导致细胞毒性。
单克隆验证：单细胞来源的克隆可避免多克隆混合导致的表达异质性，需至少验证 2-3 代细胞的荧光稳定性。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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