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EJ-GFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:48:49
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详细内容
EJ-GFP-Puro稳转株
英文名称 | EJ-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H1440 |
中文名称 | GFP 标记的 EJ 稳转株 |
Lot number | EJ-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | DMEM-H + 10% FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
EJ-GFP-Puro 稳转株概述
EJ 细胞是一种源自人膀胱移行细胞癌的永生化细胞系，常用于癌症生物学、药物筛选等研究。**GFP（绿色荧光蛋白）** 作为报告基因，可通过荧光显微镜直观观察细胞表达情况；**Puro（嘌呤霉素）** 则是一种抗生素，用于稳转株的筛选和维持。
EJ-GFP-Puro 稳转株是指通过基因工程手段，将携带 GFP 基因的表达载体（通常含 Puro 抗性基因）稳定整合到 EJ 细胞基因组中，使细胞能持续表达 GFP 且对嘌呤霉素具有抗性的细胞株。
构建流程与关键技术
1. 载体设计与制备
载体组成：
GFP 表达盒：含 GFP 编码序列及启动子（如 CMV 启动子），驱动 GFP 在细胞中持续表达。
Puro 抗性基因：用于筛选成功转染的细胞（未整合载体的细胞会被嘌呤霉素杀死）。
其他元件：复制原点、多克隆位点等。
载体形式：常用质粒载体（如 pEGFP-Puro）或病毒载体（如慢病毒，适用于难转染细胞）。
2. 细胞转染与筛选
转染方法：
化学法：脂质体转染（适用于多数贴壁细胞）。
物理法：电穿孔（适用于悬浮细胞或难转染细胞）。
病毒感染：慢病毒或逆转录病毒介导（效率高，适合稳定整合）。
筛选过程：
转染后 48⁻⁷2 小时，加入嘌呤霉素（浓度需预实验优化，如 1-5 µg/mL）。
未成功整合载体的细胞逐渐死亡，存活细胞形成单克隆（通过有限稀释法或流式细胞分选获得）。
3. 稳转株鉴定
荧光检测：荧光显微镜观察 GFP 表达，确认阳性细胞。
Western blot：检测 GFP 蛋白表达水平，验证稳定性。
基因组 PCR：扩增整合的 GFP 基因，确认 DNA 水平整合。
功能验证：如研究目的基因与 GFP 融合，需验证目的基因功能是否受影响。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
热门标签：EJ-GFP-Puro稳转株,GFP,标记的,EJ,稳转株,EJ-GFP-Puro,polyclonal,stable,cell,line
