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HUVEC-GFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:48:49
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详细内容
HUVEC-GFP-Puro稳转株
产品名称 | HUVEC-GFP-Puro 稳转株 |
产品货号 | XY-H1535 |
中文名称 | GFP 标记的 HUVEC 稳转株 |
Lot number | HUVEC-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | ECM专用培养基 |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
1. 核心组件解析
HUVEC 细胞：
来源于人脐静脉的内皮细胞，常用于血管生成、炎症反应、肿瘤微环境等研究，具有典型的内皮细胞形态和功能（如形成血管样结构）。
GFP（绿色荧光蛋白）：
作为报告基因，表达后使细胞在荧光显微镜下发出绿色荧光，便于实时观察细胞定位、迁移、增殖等动态过程，或通过流式细胞术筛选阳性细胞。
Puro（嘌呤霉素）：
作为筛选标记基因，赋予细胞对嘌呤霉素的抗性。在稳转株构建过程中，未成功整合目的基因的细胞会被嘌呤霉素杀死，从而筛选出稳定表达 GFP 的单克隆细胞。
2. 构建流程与技术要点
载体设计：
构建含 GFP 基因和嘌呤霉素抗性基因（PuroR）的重组质粒（如慢病毒载体、逆转录病毒载体）。
载体需包含启动子（如 CMV 启动子）以驱动 GFP 持续表达。
细胞转染 / 感染：
HUVEC 属于原代细胞，通常需通过慢病毒感染提高转染效率（因原代细胞分裂能力有限，质粒转染效率较低）。
抗性筛选：
感染后加入嘌呤霉素（浓度需预先优化），未整合载体的细胞死亡，存活细胞即为稳定表达 GFP 的单克隆株。
单克隆验证：
通过有限稀释法或流式细胞术分选单克隆细胞，利用荧光显微镜、Western blot 等验证 GFP 表达水平及稳定性。
3. 应用场景
细胞示踪与成像：
用于活体或体外实验中追踪 HUVEC 的迁移（如肿瘤血管生成研究）、细胞间相互作用（如内皮细胞与免疫细胞的黏附）。
药物筛选与毒性检测：
通过 GFP 荧光强度变化或细胞存活率（结合嘌呤霉素抗性）评估药物对内皮细胞的影响（如抗血管生成药物）。
基因功能研究：
作为基础细胞株，进一步转染其他目的基因（如突变型 VEGF、Ang1 等），研究基因对内皮细胞功能的调控机制。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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