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SiHa-GFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:48:49
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详细内容
SiHa-GFP-Puro稳转株
英文名称 | SiHa-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H1544 |
中文名称 | GFP 标记的 SiHa 稳转株 |
Lot number | SiHa-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | DMEM-H + 10% FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
SiHa-GFP-Puro 稳转株概述
SiHa 细胞是源自人宫颈鳞状细胞癌的永生化细胞系，常用于肿瘤生物学、病毒感染机制（如 HPV 相关研究）等领域的实验。
**GFP（绿色荧光蛋白）** 作为报告基因，可通过荧光显微镜直接观察细胞表达情况，便于追踪细胞状态、定位蛋白或筛选阳性克隆。
**Puro（嘌呤霉素）** 是一种抗生素，用于稳转株的筛选 —— 通过质粒载体将目的基因（如 GFP）与嘌呤霉素抗性基因共转染细胞，未成功整合目的基因的细胞会被嘌呤霉素杀死，存活细胞即为稳定表达目的基因的稳转株。
SiHa-GFP-Puro 稳转株的构建流程
载体构建
构建含 GFP 基因和嘌呤霉素抗性基因的重组质粒（如 pEGFP-Puro 载体）。
通过酶切、连接等分子克隆技术确保 GFP 基因与抗性基因正确插入载体。
细胞转染
使用脂质体转染、电穿孔等方法将重组质粒导入 SiHa 细胞。
转染后细胞需培养 24~48 小时，使质粒初步表达。
抗生素筛选
加入嘌呤霉素（浓度需预实验优化，通常为 0.5~2 µg/mL），未成功整合质粒的细胞逐渐死亡，存活细胞形成抗性克隆（约需 1~2 周）。
筛选期间需更换新鲜培养基并维持嘌呤霉素浓度，避免抗性细胞过度增殖导致营养不良。
单克隆化与鉴定
通过有限稀释法或流式细胞术（FACS）筛选单克隆细胞，确保稳转株遗传背景一致。
鉴定方法：
荧光显微镜观察 GFP 表达（绿色荧光强度及分布）。
Western blot 检测 GFP 蛋白水平。
基因组 PCR 验证 GFP 基因整合至细胞基因组。
应用场景
细胞示踪与成像
用于体内外细胞迁移、侵袭实验（如 Transwell、划痕实验），通过荧光信号追踪 SiHa 细胞的动态变化。
结合活体成像技术，观察肿瘤细胞在动物模型中的定植与转移（如裸鼠移植瘤模型）。
药物筛选与机制研究
利用 GFP 荧光强度评估药物对细胞增殖的影响（如 MTT/CCK-8 实验联合荧光定量）。
研究 GFP 标记蛋白的亚细胞定位（如与细胞器标记物共染），分析蛋白互作或信号通路。
基因功能研究
作为基础细胞模型，进一步敲低 / 过表达其他基因（如 HPV 相关基因 E6/E7），结合 GFP 荧光筛选双稳转株。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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