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ME-180-GFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:48:49
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详细内容
ME-180-GFP-Puro稳转株
英文名称 | ME-180-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H1545 |
中文名称 | GFP 标记的 ME-180 稳转株 |
Lot number | ME-180-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | McCOY's 5A + 10% FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
ME-180-GFP-Puro 稳转株概述
ME-180 细胞是一种源自人宫颈鳞癌的永生化细胞系，具有典型的上皮细胞形态，常用于肿瘤生物学、细胞信号传导等领域的研究。
**GFP（绿色荧光蛋白）** 作为报告基因，可通过荧光显微镜直接观察细胞的转染效率及表达情况，便于实时追踪细胞状态或蛋白定位。
**Puro（嘌呤霉素）** 是一种抗生素，用于稳转株筛选 —— 通过构建含嘌呤霉素抗性基因的载体，转染后用嘌呤霉素处理细胞，未成功整合目的基因的细胞会被杀死，存活细胞即为稳定表达目标基因的稳转株。
核心特性
特性 说明
细胞来源 人宫颈鳞癌，ATCC 等权威细胞库可查
表达标记 组成型表达 GFP，荧光强度稳定，可通过流式细胞术（FACS）或荧光显微镜检测
筛选标记 含嘌呤霉素抗性基因（PuroR），需用嘌呤霉素（通常浓度 1-5 µg/mL）维持筛选压力
应用场景 细胞示踪、蛋白定位研究、药物递送系统评估、肿瘤细胞迁移 / 侵袭实验等
构建流程（示意图）
载体构建：将 GFP 基因与 Puro 抗性基因插入到表达载体（如慢病毒载体、质粒载体）中，形成重组质粒。
细胞转染：通过脂质体转染、电穿孔或病毒感染（如慢病毒）将重组载体导入 ME-180 细胞。
筛选与扩增：
转染后 48⁻⁷2 小时加入嘌呤霉素，杀死未成功转染的细胞。
单细胞克隆化（如有限稀释法）确保单克隆来源，避免混合克隆干扰实验结果。
鉴定验证：
荧光显微镜观察 GFP 表达强度及均匀性。
Western blot 检测 GFP 蛋白水平，qPCR 验证基因整合情况。
培养与维护要点
培养基：通常使用 DMEM 或 MEM 培养基，添加 10% 胎牛血清（FBS）、1% 双抗（青霉素 / 链霉素）。
嘌呤霉素维持：筛选成功后，可将嘌呤霉素浓度降至最低维持浓度（如 0.5-1 µg/mL），避免长期高浓度导致细胞毒性。
传代注意：
避免过度胰酶消化，以防损伤细胞膜及 GFP 表达。
传代时保持细胞密度在 30%-80%，避免密度过高导致荧光表达不均。
冻存与复苏：
冻存液建议使用 90% FBS+10% DMSO，液氮保存。
复苏时快速解冻，24 小时内更换新鲜培养基以去除 DMSO。
常见应用与案例
肿瘤细胞示踪：将 ME-180-GFP-Puro 细胞接种于小鼠体内，通过活体成像技术观察肿瘤生长及转移路径。
药物递送效率评估：利用 GFP 荧光强度变化，量化纳米药物载体对宫颈癌细胞的靶向递送效率。
信号通路研究：结合 RNA 干扰（shRNA）或 CRISPR-Cas9 技术，构建 GFP 标记的基因敲除 / 过表达稳转株，分析通路蛋白定位变化。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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