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KU812-GFP-Puro稳转株
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详细内容
KU812-GFP-Puro稳转株
英文名称 | KU812-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H1666 |
中文名称 | GFP 标记的 KU812 稳转株 |
Lot number | KU812-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 骨髓母细胞样 |
生长特性 | 悬浮生长 |
细胞株 构建流程 | (1)构建目的基因过表达慢病毒重组质粒,并包装慢病毒; (2)慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞; (3)用最佳浓度药物对细胞株进行筛选,获得混合稳转株; (4)稳转株质检(COA)。 |
完全培养基 | RPMI-1640 + 20% FBS + 1% P/S(选择添加) |
培养条件 | (1) 气相:95%空气,5% CO2;(2) 温度:37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |

构建原理:通过将包含绿色荧光蛋白(GFP)基因和嘌呤霉素(Puro)抗性基因的外源 DNA 克隆到载体上,然后将重组载体转染至 KU812 细胞中,使其整合到细胞的染色体中。这样,随着细胞分裂,外源基因能够稳定传递下去,并且细胞具有对嘌呤霉素的抗性,便于后续的筛选。
特点与应用:KU812 细胞本身来源于慢性髓性白血病患者暴发期的外周血,具有嗜碱性细胞的一些标记。在此基础上构建的稳转株,稳定表达 GFP,使得细胞在荧光显微镜下能够发出绿色荧光,可用于体外细胞示踪、细胞分选以及体内成像等实验,方便对细胞的行为和分布进行观察和研究。同时,Puro 抗性基因的存在使得在培养过程中可以使用嘌呤霉素进行筛选,只有成功整合了外源基因并稳定表达的细胞才能在含有嘌呤霉素的培养基中存活,从而保证了细胞群体的稳定性和均一性。
培养与保存:KU812 细胞通常在 RPMI - 1640 培养基中培养,添加 20% 胎牛血清(FBS)和 1% 青霉素 - 链霉素(P/S)。对于 KU812 - GFP - Puro 稳转株,在培养时除了满足上述条件外,还需要在培养基中添加适量的嘌呤霉素进行筛选和维持稳定表达。细胞的冻存条件一般为使用含有 55% 基础培养基、40% FBS 和 5% 二甲基亚砜(DMSO)的冻存液,在液氮中保存。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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