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HCF-GFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:48:35
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详细内容
HCF-GFP-Puro稳转株
英文名称 | HCF-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H2005 |
中文名称 | GFP 标记的 HCF 稳转株 |
Lot number | HCF-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 成纤维细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | DMEM-H+10%FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
一、基本概念
HCF-GFP-Puro 稳转株是通过基因工程技术构建的一类细胞株，具备以下关键特征：
HCF：通常指某种特定的靶基因或蛋白（需结合具体研究背景，可能是细胞因子、受体、酶等，例如某些文献中 HCF 可能代表特定细胞功能相关基因）。
GFP（绿色荧光蛋白）：作为报告基因，表达后细胞会发出绿色荧光，便于通过荧光显微镜或流式细胞术等手段进行可视化追踪、筛选及示踪。
Puro（嘌呤霉素）：是一种抗生素，用于稳转株的筛选。稳转株因整合了含嘌呤霉素抗性基因的载体，可在含嘌呤霉素的培养基中存活，未成功转染的细胞则被淘汰。
核心用途：用于长期研究基因功能（如蛋白定位、细胞信号通路、基因表达调控等），或制备稳定表达目标蛋白的细胞模型（如药物筛选、细胞生物学研究等）。
二、构建流程（典型步骤）
载体构建
构建含目标基因（HCF）、GFP 报告基因及嘌呤霉素抗性基因的重组质粒载体（如慢病毒载体、逆转录病毒载体或质粒转染载体）。
载体中 GFP 通常与目标基因共表达（如通过 IRES 元件或融合蛋白形式），确保两者表达的关联性。
细胞转染 / 感染
根据细胞类型选择转染方法：
贴壁细胞：常用脂质体转染、电穿孔法。
难转染细胞（如原代细胞）：采用病毒包装（慢病毒或逆转录病毒）进行感染，提高转染效率。
嘌呤霉素筛选
转染后 48⁻⁷2 小时，加入嘌呤霉素进行压力筛选（浓度需预实验优化，避免浓度过高导致全死亡或过低导致筛选失败）。
未整合载体的细胞逐渐死亡，存活细胞即为初步筛选的稳转株。
单克隆化与鉴定
有限稀释法 / 流式分选：将细胞稀释至单细胞密度，接种至 96 孔板，培养获得单克隆细胞株，避免多克隆混存导致的表达不均。
鉴定方法：
荧光检测：显微镜下观察 GFP 表达（绿色荧光），确认细胞是否成功表达报告基因。
分子生物学检测：通过 Western blot 检测 HCF 蛋白表达水平，或通过 qPCR 检测 mRNA 水平。
功能验证：根据研究目的，进行细胞功能实验（如增殖、凋亡、迁移等）。
稳转株扩增与冻存
筛选出的阳性克隆扩大培养，验证稳定性（如传代 10 代以上后检测 GFP 和 HCF 表达是否持续）。
合格的稳转株冻存于液氮中，备用。
三、优势与应用场景
优势
稳定表达：目标基因整合至细胞基因组，可长期传代并维持表达，避免瞬时转染的表达时效性问题。
可视化追踪：GFP 荧光便于实时观察细胞状态、定位或分选（如流式细胞术筛选高表达克隆）。
高效筛选：嘌呤霉素抗性筛选可快速富集阳性细胞，操作相对简便。
典型应用
基因功能研究：通过过表达或敲低 HCF 基因，结合 GFP 示踪，分析其对细胞表型的影响（如细胞周期、凋亡等）。
药物研发：构建稳定表达药物靶点（HCF）的细胞株，用于高通量药物筛选或药物作用机制研究。
细胞示踪与成像：在活体或体外实验中，利用 GFP 荧光追踪细胞迁移、分化或相互作用（如肿瘤细胞转移研究）。
蛋白互作研究：结合免疫共沉淀（Co-IP）等技术，利用 GFP 标记蛋白纯化复合物，分析 HCF 的互作蛋白网络。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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