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hCMEC/D3-GFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/20 11:10:37
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详细内容
hCMEC/D3-GFP-Puro稳转株
英文名称 | hCMEC/D3-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H1853 |
中文名称 | GFP 标记的 hCMEC/D3 稳转株 |
Lot number | hCMEC/D3-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 梭状，细长型细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | ECM 培养基 + 10% FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
hCMEC/D3-GFP-Puro 稳转株概述
hCMEC/D3 细胞是一种人脑微血管内皮细胞系，常用于血脑屏障（BBB）相关研究，例如药物转运、炎症反应或神经血管单元的机制探究。
** 稳转株（稳定转染细胞株）** 是通过基因工程技术将外源基因（如 GFP、Puro 抗性基因）稳定整合到细胞基因组中，使细胞能够长期表达目标基因且遗传稳定。
关键组成与特性
GFP（绿色荧光蛋白）
作为报告基因，用于可视化观察细胞形态、定位及细胞内动态过程（如蛋白表达、细胞迁移）。
优势：荧光信号稳定，可通过荧光显微镜、流式细胞术等实时追踪细胞。
Puro（嘌呤霉素）
作为筛选标记，赋予细胞嘌呤霉素抗性。
作用：在转染后通过嘌呤霉素筛选培养基淘汰未成功整合外源基因的细胞，确保稳转株的纯度。
hCMEC/D3 细胞特性
来源：原代人脑微血管内皮细胞经永生化处理（如 hTERT 转染）获得，保留部分 BBB 特征（如表达紧密连接蛋白 ZO-1、claudin-5）。
应用场景：
研究药物穿越血脑屏障的能力（如通过 Transwell 共培养模型检测跨膜转运）。
模拟中枢神经系统炎症或感染时内皮细胞的反应（如细胞因子刺激下的通透性变化）。
血管生成或血管损伤机制研究。
构建流程与技术要点
1. 载体构建
质粒设计：
包含 GFP 编码序列（通常与目标基因共表达，或直接作为目标基因）。
携带 Puro 抗性基因（如嘌呤霉素 N - 乙酰转移酶基因 puroR），用于筛选。
示例载体结构：
plaintext
[CMV启动子] - [GFP基因] - [IRES序列] - [PuroR基因] - [polyA尾]
（IRES：内部核糖体进入位点，允许双基因共表达）
2. 细胞转染
方法：常用脂质体转染（如 Lipofectamine 2000）或电穿孔法，适用于贴壁生长的 hCMEC/D3 细胞。
注意事项：
细胞密度需控制在 50%~70% 融合度，避免过度生长影响转染效率。
转染后 24~48 小时需更换为含嘌呤霉素的筛选培养基（浓度需预实验优化，通常为 1~5 µg/mL）。
3. 筛选与单克隆化
嘌呤霉素筛选：
未转染细胞在筛选培养基中约 3~5 天死亡，存活细胞为成功整合质粒的单克隆。
单克隆挑选：
通过有限稀释法或流式细胞术分选单细胞，接种于 96 孔板，培养至肉眼可见克隆后扩大培养。
验证：通过荧光显微镜观察 GFP 表达均一性，Western blot 检测 GFP 蛋白水平，PCR 鉴定外源基因整合。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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