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HepG2-Puro+ffluc稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:48:35
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详细内容
HepG2-Puro+ffluc稳转株
英文名称 | HepG2-Puro+ffluc polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H2184 |
中文名称 | ffluc 标记的 HepG2 稳转株 |
Lot number | HepG2-24D3P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | DMEM-H + 10% FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
HepG2-Puro+ffluc 稳转株概述
HepG2-Puro+ffluc 稳转株是基于人肝癌细胞系 HepG2 构建的稳定转染细胞株，通过引入特定外源基因并筛选获得，常用于生物医学研究（如肿瘤生物学、基因功能研究、药物筛选等）。以下从背景、构建方法、应用场景、优势与注意事项等方面展开说明：
一、核心组成与特性
基础细胞系：HepG2
来源：人肝癌细胞，上皮样形态，贴壁生长，具有肝癌细胞的典型生物学特性（如高增殖能力、侵袭性等）。
应用：肝癌研究的经典模型，广泛用于药物代谢、基因表达调控、肿瘤微环境等领域。
外源基因与筛选标记
ffluc：荧光素酶基因（Firefly luciferase），编码荧光素酶蛋白，可催化荧光素氧化产生生物发光。常用于活体成像（in vivo imaging），实时追踪细胞在动物体内的分布、增殖或转移。
Puro：嘌呤霉素抗性基因（Puromycin resistance gene），用于稳转株筛选。通过在培养基中添加嘌呤霉素，淘汰未成功整合外源基因的细胞，保留稳定表达 ffluc 的细胞克隆。
关键特性
稳定表达：外源基因整合至细胞基因组中，可长期传代并维持荧光素酶活性。
生物发光检测：需底物（如 D - 荧光素）触发发光，信号强度与细胞数量呈正相关，适用于定量分析。
二、构建流程（典型方法）
载体构建
构建含ffluc 基因和Puro 抗性基因的重组质粒（如慢病毒载体、逆转录病毒载体或质粒载体）。
载体需包含启动子（如 CMV 启动子）驱动 ffluc 表达，并确保 Puro 抗性基因独立表达或共表达。
细胞转染
通过病毒感染（慢病毒 / 逆转录病毒）或化学转染（如脂质体转染）将载体导入 HepG2 细胞。
病毒感染效率较高，适用于难转染的细胞系，且整合稳定性更强。
筛选与克隆化
转染后加入嘌呤霉素（Puro）进行筛选，未成功整合抗性基因的细胞死亡，存活细胞为初步稳转株。
通过有限稀释法或单细胞分选获得单克隆细胞，验证 ffluc 表达均一性（如发光强度检测）。
鉴定与验证
分子水平：PCR 检测 ffluc 基因整合，Western blot 检测荧光素酶蛋白表达。
功能水平：加入 D - 荧光素后，通过微孔板检测仪或活体成像系统检测发光信号，确认活性及稳定性。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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