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U87 MG-Puro+ffluc稳转株
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详细内容
U87 MG-Puro+ffluc稳转株
英文名称 | U87 MG-Puro+ffluc polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H2206 |
中文名称 | ffluc 标记的 U87 MG 稳转株 |
Lot number | U87 MG-24D3P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | (1)构建目的基因过表达慢病毒重组质粒,并包装慢病毒; (2)慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞; (3)用最佳浓度药物对细胞株进行筛选,获得混合稳转株; (4)稳转株质检(COA)。 |
完全培养基 | DMEM-H + 10% FBS + 1% P/S(选择添加) |
培养条件 | (1) 气相:95%空气,5% CO2;(2) 温度:37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |

U87 MG-Puro+ffluc 稳转株概述
U87 MG 细胞是一种源自人脑胶质母细胞瘤的永生化细胞系,因其恶性程度高、增殖能力强,常用于肿瘤生物学、药物筛选及基因编辑等研究。** 稳转株(Stable Cell Line)** 指通过基因工程手段将外源基因稳定整合到细胞基因组中,使其能长期表达特定蛋白或标记物的细胞株。
关键组件解析:
Puro:
即嘌呤霉素(Puromycin),是一种抗生素,常用于稳转株筛选。通过将携带嘌呤霉素抗性基因的质粒转入细胞,未成功整合外源基因的细胞会被嘌呤霉素杀死,存活细胞即为稳定转染的细胞株。
ffluc:
指萤火虫荧光素酶(Firefly Luciferase),是一种报告基因。其表达的荧光素酶可催化荧光素氧化并产生生物荧光,通过活体成像技术(如小动物成像系统)可实时监测细胞在体内的增殖、迁移及肿瘤形成等动态过程,广泛应用于肿瘤研究、药物代谢及基因治疗评估。
构建流程与技术要点
1. 载体构建
设计包含以下元件的重组质粒:
目的基因 / 报告基因(ffluc):编码荧光素酶的 cDNA 序列。
嘌呤霉素抗性基因(PuroR):用于筛选稳转细胞。
启动子(如 CMV):驱动基因持续表达。
复制原点及筛选标记(如氨苄青霉素抗性):便于质粒在细菌中扩增。
2. 细胞转染
通过脂质体转染、电穿孔或病毒介导(如慢病毒、逆转录病毒)等方法将重组质粒导入 U87 MG 细胞。
病毒介导法常用于难转染的细胞,可提高外源基因整合效率,尤其适用于构建稳定表达细胞株。
3. 稳转株筛选与鉴定
药物筛选:转染后 48⁻⁷2 小时加入嘌呤霉素(浓度需预实验优化),持续培养 1-2 周,未成功整合抗性基因的细胞死亡,存活细胞形成单克隆。
鉴定方法:
荧光素酶活性检测:裂解细胞后加入荧光素底物,通过酶标仪检测发光强度,验证 ffluc 表达水平。
Western blot:检测荧光素酶蛋白的表达。
活体成像:将细胞接种至动物模型(如裸鼠),注射荧光素后通过成像系统观察体内荧光信号,确认稳转株在活体中的功能活性。
应用场景
1. 肿瘤生物学研究
体内成瘤模型:将 U87 MG-Puro+ffluc 稳转株接种于免疫缺陷小鼠,通过荧光成像实时追踪肿瘤生长速度、转移灶分布,评估抗肿瘤药物疗效或基因治疗效果。
细胞迁移与侵袭研究:结合 Transwell 实验或斑马鱼模型,利用荧光信号标记细胞,观察其在体外或体内的迁移能力。
2. 药物筛选与药效评估
通过荧光素酶活性变化反映细胞代谢或存活状态,高通量筛选潜在抗肿瘤化合物。例如,药物处理后若荧光信号减弱,提示细胞增殖受抑制或凋亡增加。
3. 基因编辑与功能研究
作为工具细胞株,可进一步进行 CRISPR-Cas9 基因编辑(如敲除抑癌基因或过表达致癌基因),结合 ffluc 标记追踪基因编辑后细胞的生物学行为变化。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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