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HEK-293T-Puro+ffluc2稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:48:35
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详细内容
HEK-293T-Puro+ffluc2稳转株
产品名称 | HEK-293T-ffluc2-Puro 稳转细胞株 |
产品货号 | XY-H2228 |
中文名称 | ffluc2 标记的 HEK-293T 稳转细胞株 |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转细胞株； （4）稳转细胞株质检（COA）。 |
完全培养基 | DMEM-H + 10% FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
共享方式 | 公益性共享 |
HEK-293T-Puro+ffluc2 稳转株的关键要素
1. 筛选标记：嘌呤霉素（Puro）
作用机制：嘌呤霉素是一种氨基糖苷类抗生素，能通过抑制蛋白质合成杀死未成功整合外源基因的细胞。稳转株中通常携带嘌呤霉素抗性基因（Puroⁿ），使细胞在含嘌呤霉素的培养基中存活。
应用场景：用于筛选成功转染并稳定表达目标基因的细胞，确保外源基因在细胞系中的持续存在。
2. 报告基因：萤火虫荧光素酶 2（ffluc2）
ffluc2 的特点：
萤火虫荧光素酶（Firefly Luciferase）是一种生物发光酶，能催化荧光素氧化并产生可见光，可通过荧光检测仪（如微孔板读数仪）定量检测。
ffluc2通常是萤火虫荧光素酶的优化版本，可能具有更高的稳定性、活性或光谱特性，便于在活体成像、细胞示踪、药物筛选等实验中实时监测基因表达或细胞行为。
应用场景：
体内成像：将稳转株注射到动物模型中，通过荧光成像追踪肿瘤生长、转移或药物分布。
体外检测：定量分析启动子活性、信号通路激活程度或药物对基因表达的影响。
构建流程与技术要点
1. 载体设计
构建包含ffluc2 基因和 ** 嘌呤霉素抗性基因（Puroⁿ）** 的表达载体（如慢病毒载体或质粒），通常由以下元件组成：
启动子（如 CMV、EF1α）驱动 ffluc2 和 Puroⁿ的转录。
多克隆位点（MCS）用于插入其他目标基因（如需共表达的蛋白）。
荧光标记（如 GFP）辅助可视化转染效率（可选）。
2. 细胞转染与筛选
转染方法：常用脂质体转染（如 Lipofectamine）、电穿孔或慢病毒感染（适用于难转染的细胞）。
药物筛选：转染后 48⁻⁷2 小时，加入嘌呤霉素（浓度需预实验优化，通常为 0.5-2 µg/mL），未成功整合抗性基因的细胞逐渐死亡，存活细胞形成稳转株。
单克隆化：通过有限稀释法或流式细胞分选（FACS）获得单克隆细胞，确保基因表达的均一性。
3. 鉴定与验证
分子水平：通过 PCR 检测 ffluc2 基因的整合，qRT-PCR 或 Western blot 验证其 mRNA 和蛋白表达。
功能水平：荧光素酶活性检测（加入荧光素底物后测发光值），确认 ffluc2 的生物学功能。
稳定性测试：连续传代 10 代以上，检测荧光素酶活性是否维持稳定，验证基因整合的稳定性。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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