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HEK-293T-mCherry-BSD+ffluc稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:48:35
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详细内容
HEK-293T-mCherry-BSD+ffluc稳转株
英文名称 | HEK-293T-mCherry-BSD+ffluc polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H2230 |
中文名称 | mCherry 和 ffluc 双标的 HEK-293T 稳转株 |
Lot number | HEK-293T-31B5P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | DMEM-H + 10% FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
关键元件解析
mCherry
一种红色荧光蛋白，常用于细胞标记和示踪。通过荧光显微镜或流式细胞术可直观观察细胞状态，监测转染效率或细胞增殖情况。
优势：光稳定性强、激发 / 发射波长（约 587 nm 激发，610 nm 发射）适用于多色荧光实验。
BSD（Blasticidin 抗性基因）
BSD 基因表达产物可使细胞对杀稻瘟菌素（Blasticidin）产生抗性，用于稳转株的筛选和维持。
筛选流程：转染后在培养基中添加 Blasticidin，未成功整合外源基因的细胞会被杀死，存活细胞即为稳定转染株。
ffluc（萤火虫荧光素酶基因）
编码萤火虫荧光素酶，可催化荧光素氧化并产生生物荧光，常用于报告基因检测、体内成像（如动物活体成像）或细胞活力分析。
应用场景：通过检测荧光强度定量分析基因表达水平、药物处理效果或细胞凋亡率等。
构建流程与技术要点
载体构建
将 mCherry、BSD 和 ffluc 基因克隆至同一质粒载体（如慢病毒载体或逆转录病毒载体），确保各元件独立表达（通常使用不同启动子，如 CMV 启动子驱动 mCherry 和 ffluc，EF1α 启动子驱动 BSD）。
细胞转染
常用方法：磷酸钙转染、脂质体转染或电穿孔法（HEK-293T 细胞对转染试剂兼容性较好）。
若使用病毒载体（如慢病毒），需先包装病毒颗粒，再感染 HEK-293T 细胞以提高整合效率。
抗性筛选与单克隆化
转染后 48⁻⁷2 小时加入 Blasticidin（浓度需预实验优化，通常为 5-10 µg/mL），持续筛选 2-3 周，直至未转染细胞全部死亡。
通过有限稀释法或流式细胞术分选单克隆细胞，扩大培养后验证目的基因表达稳定性。
功能验证
荧光检测：显微镜观察 mCherry 阳性细胞比例，流式细胞术分析荧光强度均一性。
ffluc 活性检测：加入荧光素底物后，用酶标仪或活体成像系统检测荧光信号，验证酶活性及表达水平。
稳定性评估：传代培养 10 代以上，定期检测荧光表达和 ffluc 活性，确保基因未丢失或沉默。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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