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NCI-H716-Puro+ffluc稳转株
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详细内容
NCI-H716-Puro+ffluc稳转株
英文名称 | NCI-H716-Puro+ffluc polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H2280 |
中文名称 | ffluc 标记的 NCI-H716 稳转株 |
Lot number | NCI-H716-24D3P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 悬浮并部分聚团生长 |
细胞株 构建流程 | (1)构建目的基因过表达慢病毒重组质粒,并包装慢病毒; (2)慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞; (3)用最佳浓度药物对细胞株进行筛选,获得混合稳转株; (4)稳转株质检(COA)。 |
完全培养基 | RPMI-1640 + 10% FBS + 1% P/S(选择添加) |
培养条件 | (1) 气相:95%空气,5% CO2;(2) 温度:37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |

NCI - H716 细胞:NCI - H716 细胞是 1984 年从一名 33 岁白人男性结肠腺癌患者的腹水转移病灶中分离出的。该细胞含有多巴脱羧酶,具有内分泌分泌特征的细胞质致密核心颗粒,不表达 TAG - 72 或 CA19 - 9 抗原,也不产生癌胚抗原(CEA),可用于 3D 细胞培养、癌症研究等。
Puro(嘌呤霉素)的作用:在这个稳转株中,Puro 主要用于筛选稳定转染的细胞。商业化的慢病毒载体多数携带 pac 基因,该基因编码嘌呤霉素 N - 乙酰转移酶,赋予细胞对嘌呤霉素的抗性。将外源 DNA 或 shRNA 克隆到带有 pac 基因的载体上,重组载体转染至 NCI - H716 细胞并整合到其染色体中,能随细胞分裂稳定传递。使用嘌呤霉素进行筛选,只有成功转染并整合了外源基因的细胞才能在含有嘌呤霉素的培养基中存活,未转染或未稳定整合的细胞会因嘌呤霉素抑制蛋白质合成而死亡。
ffluc(萤火虫荧光素酶)的作用:ffluc 基因常被用作报告基因。它编码的萤火虫荧光素酶可以催化荧光素氧化成氧化荧光素,在此过程中发出生物荧光。通过检测荧光强度,能反映 ffluc 基因的表达情况,进而间接了解与 ffluc 基因连接的目的基因的表达、启动子活性、mRNA 稳定性及翻译效率等情况。例如,将感兴趣的基因转录调控元件克隆在 ffluc 基因的上下游,构建成荧光素酶报告质粒,转染 NCI - H716 细胞后,适当刺激或处理细胞并裂解,加入荧光素酶底物,用荧光测定仪检测荧光强度,就可得出基因表达量,以确定构建序列的功能。
这种稳转株在癌症研究、药物研发等领域有重要应用,比如可用于研究结直肠癌细胞的相关信号通路、筛选针对结直肠癌细胞的药物,以及监测肿瘤细胞在体内外的生长、转移和对治疗的反应等。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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