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HUVEC原代-Puro+ffluc稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:48:35
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详细内容
HUVEC原代-Puro+ffluc稳转株
英文名称 | HUVEC原代-Puro+ffluc polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H2265 |
中文名称 | ffluc 标记的 HUVEC原代 稳转株 |
Lot number | HUVEC原代-24D3P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | ECM专用培养基 |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
一、核心概念
1. HUVEC 原代细胞
定义：人脐静脉内皮细胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cells, HUVEC），从新生儿脐带静脉中分离培养的原代细胞，具有典型的内皮细胞形态和功能（如形成血管样结构、表达 CD31 等标志物）。
应用：常用于血管生成、炎症反应、肿瘤微环境等研究，是内皮细胞生物学的经典模型。
2. 稳转株（Stable Cell Line）
定义：通过基因工程手段将外源基因稳定整合到细胞基因组中，使目的基因持续表达的细胞株。区别于瞬时转染（短期表达），稳转株可长期传代并保持基因表达。
3. Puro+ffluc 标记
Puro（嘌呤霉素）：用于筛选稳转株的抗性基因。转染时质粒携带 Puro 抗性基因，未成功整合外源基因的细胞会被嘌呤霉素杀死，存活细胞即为稳定转染株。
ffluc（萤火虫荧光素酶）：报告基因，编码荧光素酶蛋白。在底物（荧光素）存在下可发光，用于活体成像、细胞示踪、基因表达定量等，常见于肿瘤转移、药物分布等研究。
二、构建流程
载体构建
构建含目的基因（如感兴趣的功能基因）、Puro 抗性基因和 ffluc 报告基因的重组质粒（如慢病毒载体、逆转录病毒载体）。
示例载体结构：
plaintext
[启动子] - [目的基因] - [IRES/2A序列] - [ffluc基因] - [Puro抗性基因] - [终止子]
（IRES/2A 序列允许同一 mRNA 翻译出多个蛋白，确保目的基因与标记基因共表达。）
细胞转染
原代 HUVEC 通常需用高效转染方法（如慢病毒感染），因其增殖能力有限，传统脂质体转染效率较低。
慢病毒感染步骤：
包装病毒：在 293T 细胞中共转染重组质粒、包装质粒（如 psPAX2、pMD2.G），产生慢病毒颗粒。
感染 HUVEC：病毒颗粒与细胞共孵育，介导外源基因整合到基因组。
筛选与鉴定
抗性筛选：感染后加入嘌呤霉素（浓度需预实验优化），培养 1-2 周，杀死未整合质粒的细胞。
单克隆化：通过有限稀释法或流式细胞术分选单克隆细胞，确保稳转株遗传背景均一。
鉴定方法：
分子水平：PCR 检测目的基因和 ffluc 整合；qPCR/ Western blot 检测基因表达量。
功能水平：ffluc 活性检测（如 Luciferase Assay）；细胞功能实验（如血管形成能力、迁移能力）。
成像验证：活体荧光成像观察 ffluc 信号，确认细胞在体内的分布和存活。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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