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HCT-8-Puro+ffluc稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:48:35
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详细内容
HCT-8-Puro+ffluc稳转株
英文名称 | HCT-8-Puro+ffluc polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H2289 |
中文名称 | ffluc 标记的 HCT-8 稳转株 |
Lot number | HCT-8-24D3P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | RPMI-1640 + 10% FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
一、基本概念
HCT-8 细胞：来源于人结肠腺癌的细胞系，常用于肿瘤生物学、药物筛选等研究。
稳转株（稳定转染细胞株）：通过基因工程技术将外源基因（如荧光蛋白基因、抗性基因等）稳定整合到细胞基因组中，使目的基因能在细胞中长期稳定表达的细胞株。
Puro+ffluc：
Puro：嘌呤霉素（Puromycin）抗性基因，用于稳转株筛选，含该基因的细胞可在嘌呤霉素存在的培养基中存活。
ffluc：萤火虫荧光素酶（Firefly Luciferase）基因，作为报告基因，可通过荧光成像或生物发光检测细胞存在、增殖或基因表达情况。
二、构建流程
载体构建
构建含 Puro 抗性基因 和 ffluc 报告基因 的重组质粒（如慢病毒载体、逆转录病毒载体等）。
质粒中通常还包含目的基因（如需研究的靶基因），以便与标记基因共表达。
细胞转染
将重组质粒导入 HCT-8 细胞，常用方法包括病毒感染（慢病毒 / 逆转录病毒）、脂质体转染或电穿孔等。
病毒感染法：适用于难转染的细胞，整合效率高，稳定性强。
筛选与鉴定
嘌呤霉素筛选：转染后的细胞在含嘌呤霉素的培养基中培养，未成功整合抗性基因的细胞死亡，存活细胞即为初步筛选的稳转株。
荧光检测：通过荧光显微镜或流式细胞术检测 ffluc 表达，验证报告基因是否稳定表达。
分子生物学鉴定：通过 PCR、Western blot 等方法验证目的基因和标记基因的整合与表达水平。
单克隆化
通过有限稀释法或单细胞分选技术获得单细胞克隆，确保稳转株的遗传稳定性和均一性。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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