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TM3-BSD+ffluc稳转株
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详细内容
TM3-BSD+ffluc稳转株
产品名称 | TM3-ffluc2-BSD 稳转细胞株 |
产品货号 | XY-M1250 |
中文名称 | ffluc2 标记的 TM3 稳转细胞株 |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | (1)构建目的基因过表达慢病毒重组质粒,并包装慢病毒; (2)慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞; (3)用最佳浓度药物对细胞株进行筛选,获得混合稳转细胞株; (4)稳转细胞株质检(COA)。 |
完全培养基 | DMEM / F12 (1 : 1) + 5% HS + 2.5% FBS |
培养条件 | (1) 气相:95%空气,5% CO2;(2) 温度:37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
共享方式 | 公益性共享 |

一、基本概念
1. 核心组件解析
TM3 细胞:
来源于小鼠睾丸间质细胞(Leydig cells),常用于内分泌研究、激素合成机制及细胞信号传导等领域。该细胞具有分泌睾酮的能力,是生殖生物学研究的常用模型。
BSD(Blasticidin):
一种抗生素,用于真核细胞的筛选。稳转株构建中,BSD 抗性基因(如 BSD 基因)常作为筛选标记,使成功转染的细胞在含 BSD 的培养基中存活,未转染细胞被淘汰。
ffluc(Firefly Luciferase):
萤火虫荧光素酶,是一种报告基因。其表达产物可催化荧光素氧化并产生生物荧光,通过荧光成像技术(如活体成像)定量检测细胞数量、分布及基因表达水平,常用于体内外追踪、药物代谢研究或基因调控分析。
2. 稳转株定义
通过基因工程手段将 BSD 抗性基因 和 ffluc 报告基因 稳定整合到 TM3 细胞基因组中,使细胞获得 BSD 抗性 和 荧光素酶表达能力 的细胞株。该细胞株可长期稳定传代,适用于需要持续检测或筛选的实验。
二、构建流程(示意)
载体构建
设计含 BSD 抗性基因 和 ffluc 基因 的重组质粒(如慢病毒载体、逆转录病毒载体或质粒载体),通常需包含启动子(如 CMV)驱动基因表达。
示例载体结构:
plaintext
[启动子(CMV)] → [ffluc基因] → [BSD抗性基因] → [终止子]
细胞转染 / 感染
转染:通过脂质体转染、电穿孔等方法将重组质粒导入 TM3 细胞。
病毒感染:若使用慢病毒 / 逆转录病毒载体,需先包装病毒颗粒,再感染 TM3 细胞(适用于难转染细胞)。
BSD 筛选
转染 / 感染后,用含 BSD 的培养基(如 10-20 µg/mL)培养细胞,未成功整合质粒的细胞死亡,存活细胞形成单克隆(克隆化培养)。
ffluc 表达验证
通过 荧光素酶活性检测(如 Luciferase Assay 试剂盒)或 活体成像,筛选高表达 ffluc 的单克隆细胞株,确保荧光信号强度满足实验需求。
稳定性验证
传代培养稳转株(如 10 代以上),定期检测 BSD 抗性和 ffluc 表达,确认基因整合的稳定性。
三、应用场景
体内外细胞追踪
体外:通过荧光素酶活性定量检测细胞增殖、凋亡或药物处理后的存活情况(如 MTT 替代法)。
体内:将稳转株接种至小鼠体内,利用活体成像系统观察肿瘤生长、转移或药物分布(需配合生物发光成像技术)。
基因调控研究
将 ffluc 基因与目标基因的启动子连接,通过荧光强度变化反映目标基因的转录活性,研究信号通路、转录因子或药物对基因表达的调控。
药物筛选与毒性评估
利用 BSD 抗性筛选稳定表达特定靶点的 TM3 细胞,用于高通量药物筛选;通过 ffluc 信号变化评估药物对细胞功能的影响(如激素分泌与荧光信号的关联性)。
内分泌机制研究
结合 TM3 细胞的睾酮分泌特性,分析激素合成通路中基因表达与荧光信号的关联,探索内分泌疾病的分子机制。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
热门标签:TM3-BSD+ffluc稳转株,ffluc2,标记的,TM3,稳转细胞株,,TM3,稳转细胞株















