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NCI-H157-Puro+ffluc稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:48:21
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详细内容
NCI-H157-Puro+ffluc稳转株
英文名称 | NCI-H157-Puro+ffluc polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H2541 |
中文名称 | ffluc 标记的 NCI-H157 稳转株 |
Lot number | NCI-H157-24D3P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 多角细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | RPMI-1640 + 10% FBS + 1 mM丙酮酸钠+ 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液（VGA-0046-0100） |
存储条件 | 液氮 |
一、细胞背景与构建原理
NCI-H157 细胞系：
来源：该细胞系最初分离自一位非小细胞肺腺癌患者的胸腔积液，具有上皮细胞形态，贴壁生长。
遗传特征：携带 TP53 基因突变，且缺乏 KRAS 突变，常用于肺癌分子机制研究。
稳转株构建：
嘌呤霉素筛选：通过慢病毒或质粒载体将含 Puro 抗性基因的外源 DNA 导入细胞，使用嘌呤霉素（通常浓度 1-10 µg/mL）筛选 2-10 天，杀死未成功整合基因的细胞，存活细胞即为稳定表达外源基因的稳转株。
ffluc 标记：萤火虫荧光素酶基因（ffluc）与 Puro 抗性基因共表达，在 ATP、氧气和荧光素底物存在下可产生生物发光，适用于活体成像和基因表达监测。
二、应用场景
体内肿瘤模型构建：
活体成像：将稳转株接种至免疫缺陷小鼠（如裸鼠、NCG 小鼠），通过腹腔或静脉注射荧光素底物，利用高灵敏度 CCD 相机实时监测肿瘤生长、转移及药物治疗效果。例如，荧光素酶信号强度与肿瘤细胞数量呈线性相关，可定量分析肿瘤负荷。
药效评估：用于评估抗肿瘤药物的体内疗效，通过监测荧光信号变化判断药物对肿瘤细胞的抑制或杀伤作用。
基因表达调控研究：
报告基因检测：ffluc 作为报告基因，可与特定启动子或调控元件连接，研究基因转录活性。例如，将 ffluc 置于缺氧响应元件（HRE）下游，可监测肿瘤细胞在乏氧微环境中的 HIF-1α 活性。
信号通路分析：通过构建信号通路报告系统（如 NF-κB-luc），研究细胞内信号传导机制及药物干预效果。
细胞生物学基础研究：
细胞增殖与凋亡：利用 ffluc 标记追踪细胞在不同处理条件下的存活状态，结合嘌呤霉素筛选验证基因功能。
迁移与侵袭：通过划痕实验或 Transwell 模型，结合活体成像技术，分析稳转株的转移能力及相关分子机制。
三、培养与维护要点
基础培养条件：
培养基：推荐使用 RPMI 1640 培养基，添加 10% 胎牛血清（FBS）、1% 青霉素 - 链霉素，pH 7.2⁻⁷.4。
传代：当细胞密度达 80%-90% 时，用 0.25% 胰蛋白酶消化，按 1:2-1:5 比例传代，避免过度汇合导致细胞状态下降。
稳转株筛选与维持：
嘌呤霉素浓度：初始筛选浓度需通过预实验确定（通常 2-5 µg/mL），维持培养时浓度可降至 1-2 µg/mL 以减少细胞压力。
冻存与复苏：使用含 10% DMSO 的冻存液，于 - 80℃或液氮中保存。复苏时快速解冻，离心去除冻存液后接种至含完全培养基的培养瓶。
质量控制：
STR 鉴定：定期进行 STR 分型检测，确保细胞系身份正确（如 NCI-H157 的 STR 位点包括 D13S317:12、D16S539:12,13 等）。
支原体检测：使用 PCR 或荧光染色法检测，避免污染影响实验结果。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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