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SNB-19-Puro+ffluc稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:48:21
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详细内容
SNB-19-Puro+ffluc稳转株
英文名称 | SNB-19-Puro+ffluc polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H2543 |
中文名称 | ffluc 标记的 SNB-19 稳转株 |
Lot number | SNB-19-24D3P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | RPMI-1640 + 10% FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
1. 细胞背景与特性
来源：SNB-19 细胞系源自一名 75 岁男性星形细胞瘤患者的胶质母细胞瘤组织，属于人胶质母细胞瘤细胞系。其特性包括：
表达野生型 p53 蛋白，但存在 CDKN2A/p16 缺失和 PTEN 突变。
携带 IDH1 野生型基因，表达神经胶质细胞标志物 GFAP、CD133 和 EGFR。
与 U-251 MG 细胞存在 STR 交叉污染，使用时需注意验证。
2. 基因标记与筛选机制
ffluc（萤火虫荧光素酶）：作为报告基因，ffluc 在 ATP 和氧气存在下可催化荧光素氧化发光，常用于实时监测细胞活性、基因表达或体内肿瘤生长。例如，在药物筛选中，ffluc 的荧光强度可反映细胞存活或药物疗效。
Puro 筛选：通过慢病毒或质粒载体将携带 ffluc 和嘌呤霉素抗性基因（pac）的外源 DNA 导入 SNB-19 细胞，随后用嘌呤霉素（通常浓度 1-10 µg/mL）筛选稳定整合外源基因的细胞克隆。嘌呤霉素通过干扰核糖体功能杀死未成功转染的细胞，确保存活细胞稳定表达 ffluc。
3. 构建方法与技术流程
载体选择：常用慢病毒载体（如 pCDH 系列），包含 CMV 启动子驱动 ffluc 表达，并携带 pac 基因用于筛选。
转染与筛选：
病毒包装：将载体转染至 293T 细胞，收集浓缩慢病毒颗粒。
感染 SNB-19 细胞：以适当 MOI（感染复数）感染细胞，确保高效转导。
嘌呤霉素筛选：感染后 48⁻⁷2 小时，更换含嘌呤霉素的培养基，持续筛选 3-10 天，直至未转染细胞全部死亡。
单克隆筛选：通过有限稀释或流式分选获得单克隆细胞株，验证 ffluc 表达水平及稳定性。
4. 培养条件与维护
基础培养基：推荐使用 DMEM-H 培养基，添加 10% 胎牛血清（FBS）和 1% 双抗（青霉素 / 链霉素）。
生长条件：37℃、5% CO₂环境，贴壁生长，建议定期传代（1:2 至 1:4）以维持细胞状态。
冻存与复苏：使用含 90% FBS 和 10% DMSO 的冻存液，液氮保存；复苏时快速解冻并接种至预热培养基。
5. 应用场景
肿瘤研究：
体内成像：通过小动物活体成像系统（如 IVIS）监测 ffluc 标记的 SNB-19 细胞在荷瘤小鼠中的生长、转移及药物响应。
药物筛选：评估化疗药物或靶向抑制剂对胶质母细胞瘤细胞的杀伤效果，通过荧光强度变化量化细胞存活率。
信号通路研究：结合 ffluc 报告基因系统，分析特定信号通路（如 ERK1/2、PKC/PKD1/HDAC5）的激活状态。
基因功能验证：通过过表达或敲除特定基因，利用 ffluc 标记追踪基因调控对细胞增殖、凋亡的影响。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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