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HEK-293T-mRFP-Puro+CD19(h)稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/16 11:04:27
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详细内容
HEK-293T-mRFP-Puro+CD19(h)稳转株
产品名称 | HEK-293T-mRFP-Puro+CD19(h) 稳转株 |
产品货号 | XY-H2720 |
中文名称 | CD19(h) 过表达 HEK-293T 稳转株 |
Lot number | HEK-293T-32E8P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | DMEM-H + 10% FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
一、基本概念
1. 细胞株背景
HEK-293T 细胞：
人胚肾细胞系，源自 HEK-293 细胞（腺病毒转染的人胚肾细胞）的突变株，表达 SV40 大 T 抗原，常用于病毒包装（如慢病毒、腺病毒）和外源基因的高效表达。其贴壁生长特性和高转染效率使其成为基因工程和细胞治疗研究的常用工具。
稳转株（Stable Cell Line）：
通过基因工程手段将外源基因稳定整合到细胞基因组中，使目的基因在细胞分裂过程中持续表达的细胞株。相比瞬时转染，稳转株可长期维持目标基因的表达，适用于需要持续生产蛋白、病毒载体或研究基因功能的场景。
2. 关键元件解析
元件 功能与意义
mRFP 红色荧光蛋白（monomeric Red Fluorescent Protein），作为报告基因，用于可视化检测细胞转染效率和稳转株的筛选、鉴定。通过荧光显微镜或流式细胞术可直接观察细胞是否成功表达。
Puro 嘌呤霉素（Puromycin）抗性基因，用于稳转株的筛选。在转染后，通过嘌呤霉素药物压力筛选，未成功整合外源基因的细胞会被杀死，存活细胞即为稳定表达目标基因的克隆。
CD19(h) 人源 CD19 蛋白（Cluster of Differentiation 19），是 B 细胞表面特异性抗原，常用于免疫治疗（如 CAR-T 细胞疗法）的靶点研究。在此稳转株中，CD19 (h) 可能作为目标抗原，用于 CAR 结构的结合验证、抗体亲和力测试或免疫细胞功能研究。
二、构建流程与技术特点
1. 构建步骤
载体设计：
构建包含 mRFP 报告基因、Puro 抗性基因和 hCD19 编码序列的重组质粒（如慢病毒载体），通常通过多克隆位点（MCS）将各元件串联。
病毒包装：
将重组质粒转染至 HEK-293T 细胞（利用其高转染效率和病毒包装能力），生产携带目标基因的慢病毒颗粒。
细胞感染：
用慢病毒感染 HEK-293T 细胞，使外源基因整合到细胞基因组中。
药物筛选：
加入嘌呤霉素进行筛选，存活细胞为成功整合抗性基因和目标基因的稳转株。
单克隆鉴定：
通过有限稀释法或流式细胞术分选单克隆细胞，利用荧光显微镜和 Western blot 等方法验证 mRFP 和 CD19 (h) 的稳定表达。
2. 技术优势
荧光可视化：mRFP 便于实时监测细胞状态和转染效率，无需额外标记。
稳定表达：通过基因组整合实现 CD19 (h) 的持续表达，避免瞬时转染的表达波动。
药物筛选可靠性：嘌呤霉素筛选确保稳转株的纯度，减少未转染细胞的污染。
应用灵活性：适用于体外功能研究（如 CAR-T 结合实验）、抗体开发或蛋白生产。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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