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HEK-293T-GFP-Puro+CD19(h)稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/16 11:04:22
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详细内容
HEK-293T-GFP-Puro+CD19(h)稳转株
产品名称 | HEK-293T-GFP-Puro+CD19(h) 稳转株 |
产品货号 | XY-H2711 |
中文名称 | CD19(h) 过表达 HEK-293T 稳转株 |
Lot number | HEK-293T-4B10P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | DMEM-H + 10% FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
一、基本概念
1. 细胞株背景
HEK-293T 细胞：
人胚肾细胞系（Human Embryonic Kidney 293 Cells）的衍生株，经转染猿猴病毒 40（SV40）的大 T 抗原基因改造，具有强转染效率和外源基因表达能力，广泛用于病毒包装、蛋白生产和基因编辑研究。
稳转株（Stable Cell Line）：
通过基因工程手段将外源基因稳定整合到细胞基因组中，使目的基因能长期、稳定表达的细胞株。
2. 关键元件解析
GFP（绿色荧光蛋白）：
报告基因，用于直观监测细胞转染效率和外源基因表达情况（荧光显微镜下呈绿色）。
Puro（嘌呤霉素抗性基因）：
筛选标记，用于通过嘌呤霉素药物筛选获得成功整合外源基因的稳转细胞（未整合的细胞会被药物杀死）。
CD19(h)：
人源 CD19 蛋白（Cluster of Differentiation 19），属于跨膜糖蛋白，主要表达于 B 淋巴细胞表面，是免疫治疗（如 CAR-T 细胞疗法）和 B 细胞相关研究的重要靶点。
二、构建流程与技术特点
1. 构建步骤
载体设计：
构建包含 GFP 报告基因、Puro 抗性基因和 人源 CD19 基因的重组质粒（如慢病毒载体或质粒载体）。
细胞转染：
通过脂质体转染、电穿孔或病毒感染（如慢病毒）将重组载体导入 HEK-293T 细胞。
药物筛选：
加入嘌呤霉素进行筛选，存活细胞为成功整合外源基因的单克隆或多克隆稳转株。
克隆鉴定：
通过荧光显微镜观察 GFP 表达、流式细胞术检测 CD19 蛋白表面表达，以及分子生物学方法（如 PCR、Western Blot）验证基因整合和表达水平。
2. 技术优势
稳定表达：外源基因整合至基因组，可长期传代而不丢失。
可视化追踪：GFP 荧光便于实时监测细胞状态和基因表达。
高效筛选：嘌呤霉素抗性系统确保高纯度稳转细胞的获得。
人源化靶点：CD19 (h) 直接模拟人体内源性蛋白，适用于临床前药物研发和免疫机制研究。
三、应用场景
1. 免疫治疗研究
CAR-T 细胞开发：作为 CD19 抗原阳性靶细胞，用于评估 CAR-T 细胞的特异性杀伤能力。
抗体药物筛选：检测抗 CD19 抗体的结合效率和功能活性（如 ADCC、CDC 效应）。
2. 病毒载体生产
利用 HEK-293T 细胞的高效转染特性，生产携带 CD19 靶向基因的病毒载体（如慢病毒、腺相关病毒）。
3. 细胞生物学研究
分析 CD19 蛋白的信号传导通路、细胞黏附机制或与其他分子的相互作用。
研究 B 细胞发育、分化及相关疾病（如 B 细胞淋巴瘤、白血病）的模型工具。
4. 基因编辑验证
作为阳性对照细胞，验证 CRISPR-Cas9 等基因编辑技术对 CD19 基因的敲除或修饰效率。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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