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Annexin V-Alexa Fluor660 / NucBlue 细胞凋亡检测试剂盒
价格：￥ 100T/3300元
品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/15 11:06:33
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Annexin V-Alexa Fluor660 / NucBlue 细胞凋亡检测试剂盒
产品货号：XY9-410383
产品规格及价格：100T/3300元
产品简介：
细胞凋亡是细胞的基本特征之一，它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定和一些疾病发生过程等方面起着十分重要的作用。
在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。在体内，巨噬细胞可以识别翻转到细胞膜表面的PS 从而将这些程序性死亡的细胞清除，因此凋亡过程中并不伴随局部的炎症反应，而在细胞坏死的过程中则常常伴随着炎症反应。
AnnexinⅤ是一种分子量为35-36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的PS高亲和力特异性结合。PS 外翻发生在细胞核破裂，DNA 片段化以及凋亡相关蛋白出现之前，这使得Annexin V 与PS 的结合成为凋亡早期的一种重要检测标志事件。
产品应用：
1.流式细胞仪
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜
产品特点：
1.方便：可用流式细胞仪或荧光显微镜检测；
2.快速：1 小时内即可完成实验；
3.准确：能准确区分活细胞、凋亡细胞和坏死细胞，并计数各群细胞的比例。
使用方法：
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体损失导致试剂量不够用。
2.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。离心力在不损失细胞的前提下尽可能小，重悬细胞是动作要轻柔，避免多次反复的激烈吹打。不用涡旋振荡器。
3.Annexin V-FITC（等）和 Propidium iodide（等）是光敏物质，在操作时请注意避光，尽量减少它们暴露在光下的时间。有必要时可以使用带盖子的冰盒或铝箔纸避光。标记后将细胞保持在避光环境中。移液过程中短暂暴露在光线下（<30 秒）是可以接受的。
4.由于细胞凋亡是一个快速和动态的过程，因此在染色后立即进行分析。
5.使用 Annexin V-FITC（等） 试剂盒检测凋亡需要针对活细胞。不要固定细胞，固定操作会对结果产生干扰。
样品染色：
1. 离心收集悬浮细胞。离心机 300-500g 力，2-8°C，离心时间 5 分钟，弃培养基。
2. 用冷 PBS 洗涤细胞两次。（300g-400g，2-8°C，离心时间 5 分钟收集细胞）。
3. 用 100ul 1X Annexin V 结合液悬浮细胞，浓度大约为 1-5 X 106 cells/ml。
4. 在细胞悬浮液中加入 5ul Annexin V-AF 647 染色液，轻轻混匀后于 2-8°C 避光条件下孵育 5-10 分钟。
5. 加入 400ul PBS 或 1X Annexin V 结合液，轻轻混匀。
6. 立即用流式细胞仪检测。
流式细胞仪分析：
经处理过的细胞此时可以在流式细胞仪上分析。
按照常规的流式凋亡检测的操作即可。
Annexin V- Alexa Fluor 660的荧光最大激发波长662 nm，最大发射波长682 nm；NucBlue荧光最大激发波长348nm，最大发射波长在469nm。
上机检测前，须用待测细胞制备质控样本来设定流式细胞仪的荧光补偿和设置十字门的范围：
（I） 未转染 GFP 等标记的细胞
① 空白管：阴性对照组细胞，没有染色的细胞。不加 Annexin V/AF 647，Nuclear Green。用于调节电压。
② 单染管：有明显凋亡的细胞，只加 Annexin V/AF 647 染色。用于调节补偿。
③ 单染管：有明显凋亡的细胞，只加 Nuclear Green 染色。用于调节补偿
④ 检测管：待测的处理细胞，加 Annexin V/AF 647，Nuclear Green。用空白管和单阳管调节好电压补偿后获得所需要的流式数据。
（II） 有其它荧光标记的细胞
① 未转染空白管：未转染细胞，阴性对照组细胞，没有染色的细胞。不加 Annexin V/AF 647，Nuclear Green。用于调节电压。
② 转染 GFP 空白管：转染 GFP 的对照组细胞，没有染色的细胞。不加 Annexin V/AF 647，Nuclear Green。用于调补偿
③ 未转染单染管：未转染且有明显凋亡的细胞，只加 Annexin V/AF 647 染色。用于调节补偿。
④ 未转染单染管：未转染且有明显凋亡的细胞，只加 Nuclear Green 染色。用于调节补偿
⑤ 检测管：待测的处理细胞，加 Annexin V/AF 647，Nuclear Green。用空白管和单阳管调节好电压补偿后，获得所需要的流式数据。
【注】：
具体流式设置按常规方法即可。请参照流式细胞仪说明书或咨询仪器技术支持。
常见问题分析：
实验过程中 Annexin V 染不上色或阳性率偏低。可能的原因如下：
1. 用于检测的流式细胞仪/显微镜设置不当。调整使用正确的仪器设置。
2. 确定实验中的诱导剂是否能产生凋亡。可通过设定确切凋亡诱导效果的阳性药物对照来排除这一情况。
3. 细胞未启动凋亡。重新确定诱导后凋亡启动的时间点（时程实验）。
4. 细胞数量偏少。增加细胞数量。
5. 贴壁细胞消化不当。Annexin V 跟 PS 的结合需要 Ca2+离子，结合液中含有 Ca2+，EDTA的消化会影响染色，建议使用无 EDTA 的胰酶，或者消化后用 PBS 洗涤干净。
实验过程中阳性率偏高。可能的原因如下：
1. 用于检测的流式细胞仪/显微镜设置不当。调整使用正确的仪器设置。
2.细胞本身活力太差。实验中发现未经诱导凋亡的对照细胞经染色后AnnexinV+/PI+双阳性的细胞比例过高，造成这种结果的原因可能是细胞本身活力太差。建议用台盼蓝染色计算细胞的活力，台盼蓝拒染的细胞应大于95%。若活力偏低低，建议重新复苏细胞，通常刚复苏的细胞至少要传代3次以后才能进行实验。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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