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还原型谷胱甘肽(GSH)检测试剂盒
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详细内容
还原型谷胱甘肽(GSH)检测试剂盒
产品货号:XY9-4711
产品规格及价格:100T/820元
产品简介:
谷胱甘肽GSH是一种低分子自由基清除剂,它可清除O2-、H2O2、LOOH。存在于几乎身体的每一个细胞,参与细胞许多功能活动,是一种氧自由基消除剂。谷胱甘肽是研究活性氧和自由基的重要指标,亦是机体氧化物牵累的重要指标。
还原型谷胱甘肽是蛋氨酸、甘氨酸和半胱氨酸组成的一种小分子肽,是组织中主要的非蛋白质的巯基化合物,并且是GPX和GST两种酶类的底物,为这二种酶分解氢过氧化物所必需,并且能稳定含巯基的酶和防止血红蛋白及其它辅因子受氧化损伤。能可逆的转变为氧化型谷胱甘肽(GSSG),其存在形式会随着细胞内代谢的情况而发生相互转变。GSH也参与使VE恢复到还原态的作用。GSH在防止动脉粥样硬化、冠心病、防衰老、抗肿瘤、防老年性痴呆等疾病的预防、恢复、治疗的研究过程中起到重要参考作用。
还原型谷胱甘肽(GSH)检测试剂盒是一种简单易行的检测还原型谷胱甘肽的试剂盒,其检测原理是待测样品中的还原型谷胱甘肽(GSH)与发色底物DTNB反应,产生稳定黄色的TNB和GSSG,获得样品的GSH含量。该试剂盒可用于检测血浆、血清、组织、细胞等样品中还原型谷胱甘肽(GSH)含量。
可以提供各种细胞检测试剂盒。包括细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。
产品应用:
分光光度计

使用方法:
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。
2.建议次测定时先做 2-3 个样品的本底对照(空白对照),如果样本空白对照与空白管非常接近,则说明样品液中不存在干扰物质,可以不再检测样本本底对照;如果样品空白对照与空白管有显著差异,则在测定每个样本时都需要做样本的空白对照;
3.GSH 比较稳定,血液样本以 ACD 抗凝后冰箱 4℃保存,3 周内稳定。
4.请尽量使用新鲜的细胞进行测定,而不要使用冻存的细胞进行测定,避免使酶活性下降。
5.轻度溶血样本对 GSH 测定无影响。
6.全血 GSH 与吸烟和锻炼成正比。 与乙醇节制程度成反比。成年人全血 GSH 的参考区间为1.02±0.17mmol/L7.测定各孔时,各孔温度均需达到室温或 25℃,否则影响结果。
8.测定时建议使用 412nm,亦可选用 405~425nm;
9.动物样品不能立即测定,应先加入 GSH 提取液匀浆处理,沉淀后去除蛋白质,防止蛋白质所含巯基及相关酶对测定结果产生影响。处理后的提取液可放低温冰箱⁻⁷0℃保存,10 天内有效。
10.为了您的安全和 nm 健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
1. 配制 GSH 提取液(1x):
取一份 GSH 提取液(3X)加入 2 份纯水,混匀即可;
2. 配制 DTNB 显色液:量取 50mlDTNB 稀释液加入 80mgDTNB 粉末中,充分溶解即为 DTNB 显色液;也可使用精密天平称取 DTNB 粉末,配制成终浓度为 1.6%的 DTNB 显色液;配置好的 DTNB 显色液 2-8℃保存,有效期一个月。现配现用。
3. 配制 GSH 标准储存液并制作标准曲线:
将 GSH 标准(1mM)用纯水稀释成 0.1mM 的 GSH 标准溶液,即 GSH 标准(100uM),然后按下表一次加入纯水,GSH 检测缓冲液和 DTNB 显色液,混匀,25℃保温反应 10min。以 0 号管调零,用分光光度计412nm 测定各管的吸光度值,以 GSH 的浓度(uM)为横坐标,以吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线。
4. 样品准备:
a) 红细胞或血浆样品的制备:
请尽量使用新鲜的血液进行测定。
600r/min 离心 10 分钟,沉淀为红细胞,上清为血浆。
对于红细胞,用 PBS 洗涤两次。取约 50ul 红细胞沉淀或血浆,加入 50ulGSH 提取液(1x),充分 Vortex 振匀。冰浴放置 30min,4℃,12000r/min 离心 20min,取上清用于还原型谷胱甘肽(GSH)测定。
处理好的红细胞样品需用 GSH 提取液(1x)稀释 10 倍后进行后续的检测;
对于血浆样品,应直接取样进行检测。
b) 动物组织样品的制备:
称取 0.2g 样本于研钵中,加入 1ml 经 4℃预冷的 GSH 提取液(1x),冰浴条件下研磨匀浆后, 4℃,12000r/min 离心 20min,取上清用于还原型谷胱甘肽(GSH)测定。 并记录上清液的总体积。也可以用液氮研磨匀浆。
c) 细胞样品的制备:
PBS 洗涤细胞 1 次,离心收集细胞,吸尽上清。加入细胞沉淀 3 倍体积的 GSH 提取液(1x),充分 Vortex 振匀。(收集细胞前后分别对离心管进行称重,从而就可以计算出细胞沉淀的重量,10mg 细胞沉淀的体积可以粗略地看做 10ul。)对样品进行快速的冻融后,4℃或冰上孵育 5 分钟。4℃,12000r/min 离心 20min,取上清用于还原型谷胱甘肽(GSH)测定。
5. GSH 加样操作:
取 5ml 一次性离心管,按照下表依次加入试剂,混匀并注意避免产生气泡。25℃保温反应 10min。1cm 比色杯,以空白孔调零,用分光光度计 412nm 测定各管的吸光度值。
如果样品中的 GSH 浓度过高,可减少样品用量或者用 GSH 提取液(1x)适当稀释后再进行测定。
6.计算:
根据还原型谷胱甘肽(GSH)标准曲线和样品的吸光度值(样品测定孔吸光值-空白对照吸光值),可计算出样品中 GSH 的浓度(umol/L)和含量(umol/g)
组织细胞样品 GSH(umol/g)=C x VT x N /W式中:
C 为从标准曲线上查得的 GSH 浓度(umol/L)
VT 为提取液的总体积(L)
W 为样品的质量(g)
N 为稀释倍数
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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