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基质金属蛋白酶8（MMP-8）活性检测试剂盒（荧光）
价格：￥ 50T/1900元；100T/3300元
品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/16 11:04:22
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详细内容
基质金属蛋白酶8（MMP-8）活性检测试剂盒（荧光）
产品货号：XY9-49103
产品规格及价格：50T/1900元；100T/3300元
产品简介：
基质金属蛋白酶 8（MMP-8）活性的荧光检测以 “FRET 多肽底物 + 荧光酶标仪” 为主流方案，常见激发 / 发射为 490/520–525 nm，适用于细胞 / 组织裂解液与条件培养基的相对或定量活性评估。
使用方法：
1.37℃下反应如果颜色变化不明显，可以适当延长反应时间。
2.如果样品中蛋白含量低，加大样品量，裂解样品时需设法使样品中的蛋白量达到 200-500 ug 每样。
3.如果样品中激活的 MMP 水平很低，适当调节诱导细胞凋亡的时间，找一个 MMP 激活比较强的时间点进行检测。
4.MMP-8 底物避光保存，使用过程中尽量避光。
5.底物为 DMSO 溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
6.使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使 DMSO 溶液集中于管底。
7.酶标仪检测必须使用荧光检测专用的黑色 96 孔板。
一、裂解缓冲液和检测缓冲液配制
根据待测样品数准备裂解缓冲液和检测缓冲液，每 1ml 缓冲液中加入 10 ul DTT充分混匀置冰上备用。
二、样品处理
A.细胞样品
1.收集 5x10（6 次方）个细胞，在 4℃，500xg 条件下离心 5 分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
2.用冷 PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3.在细胞中加入 50 ul 冷的裂解缓冲液，高速涡旋振荡 15 秒。
4.置冰上持续振荡 20-45 分钟。
5.在 4℃，12000xg 条件下离心 15 分钟。
6.快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上保存备用
B 组织样品
1.取适量组织样本剪碎，按照每 50 mg/100 ul 冷的裂解缓冲液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体，冰上振荡 20-45 分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
2. 在 4℃，12000xg 条件下离心 5 分钟。
3.快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上或-80℃冰箱保存备用
三、对上述处理过的上清进行蛋白定量。
【注】:
1.必须进行蛋白定量，以保证后续步骤的蛋白上样量足够，否则容易出现检测不到结果的情况。
2.用 BCA 蛋白定量试剂盒进行定量的话，裂解液中不要加入 DTT。
四、MMP1 活性检测
1.取 50ul 裂解上清(含 100-200 ug 蛋白)，加入 45ul 检测缓冲液。
2.再加入 5 ul MMP-8 荧光底物，充分混匀，在 37℃下避光反应 1-2 小时。
3.荧光酶标仪检测荧光强度。Ex=325 nm，Em=400 nm。
4.根据凋亡的细胞的荧光值与对照细胞样本的荧光值的比值计算相对的 MMP1活性程度变化。
常见问题分析：
荧光强度值偏低
1.样品上样量不够:本方法检测需要的细胞数量须在 3x10（6 次方）以上，或者新鲜组织50 mg 以上，每次反应的蛋白量需要在 100 µg 以上。如果量不够，请增加细胞或组织的量。
2.样本不新鲜:使用新鲜的细胞或组织样本。
3.样品裂解不够充分:细胞或组织需要进行充分裂解，可以加入适当的蛋白酶抑制剂混合物裂解，裂解后应无明显大量的沉淀，以保证有效获得蛋白。
4.样品中激活的 MMP-8 水平偏低:首先确认模型的凋亡现象是否明显，以及根据文献和其他验证方法确认该凋亡是否激活 MMP-8。
5.检测时间点的选择是否合适:不论哪种通路的凋亡，需要在 MMP-8 被有效激活并达到相应活化程度后的一定时间范围内检测，过早或过晚均不合适。
6.不适合本方法检测:某些凋亡诱导剂诱导的凋亡可能是非依赖于 MMP-8 活化的机制，此种情况时利用本试剂盒检测 MMP-8 无明显变化，需要考虑凋亡机制的其他通路。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
热门标签：基质金属蛋白酶8,荧光,基质金属蛋白酶8（MMP-8）活性检测试剂盒（荧光）
