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谷胱甘肽-S转移酶(GSH-ST)检测试剂盒
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详细内容
谷胱甘肽-S转移酶(GSH-ST)检测试剂盒
产品货号:XY9-4713
产品规格及价格:100T/750元
产品简介:
谷胱甘肽S—转移酶(glutathione S—transferase GST)是一类与肝脏解毒有关的酶,在肝细胞中存在量很大,所以当肝细胞受损害时,GSH-ST常常很早释放到血中,血中GSH-ST的升高常常早于谷丙转氨酶(SGPT)和谷草转氨酶(SGOT),因而GSH-ST的升高可作为肝脏损伤的敏感指标。
谷胱甘肽S—转移酶广泛存在于哺乳动物各组织中,催化谷胱甘肽(GSH)与化学物质的亲电子基团结合,最终形成硫醚氨酸排出体外,在体内解毒功能上起重要作用。GSH-ST具有消除体内过氧化物及解毒双重功能。GST在谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力低下的条件下,只有清除体内脂质过氧化物(LPO)的功能。
GST具有催化还原型谷胱甘肽(GSH)与(CDNB底物)结合的能力,在一定反应时间内,其活性高低与反应前后底物浓度的变化呈线性关系。
本试剂盒适用于测定血清(浆)、组织、培养细胞等样本中的GST的活性。
可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、
细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。
可以为您提供各种颜色的M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。

使用方法:
1.管子要洗干净,先用温肥皂水刷净,再用自来水冲洗 20 遍以上,用纯水过 1-2 次后烘干即可;
2.试剂 B 配制时要加热充分溶解(温度可达 90-100℃);
3.肝素抗凝全血放置冰箱存放时间不可超过 3 天,血浆、组织块放-20℃可保存一个月;
4.试剂 A 配成储备液后,冰箱冷藏至少可保存一个月;
5.1mmol/L 的 GSH 底物现配现用;
6.上清液当天提取当天测定;
7.样品前处理参照实验方法学部分;
试剂配制
1. 试剂 A1 的配制:
使用前将 A1 粉剂加 1ml 无水乙醇充分溶解 2-8℃保存。
2. 试剂 A 工作液配制:
使用前将配制好的试剂 A1:A2 按 1:59 的比例进行配制,现配现用;
3. 试剂 B 工作液配制:
使用前将粉剂 B1 加 90~100℃的热纯水 170ml,充分溶解,将配制好的 B1 和 B2 两种溶液充分混匀,得到的为过饱和溶液,室温保存;如果出现结晶,直接取上清进行实验;
4. 试剂 C 工作液配制:
加纯水 200ml,充分溶解后,室温保存;可以保存在赠送的塑料瓶中。
5. 试剂 D 工作液配制:
加纯水 50ml,充分溶解后,2-8℃避光保存;
6. 试剂 F 工作液配制:
将试剂 F:标准溶剂储备液:纯水=1:9 的比例 10 倍稀释;
7. 标准品的配制:
1mmol/L 的 GSH 标准溶液的配制:取 3.07mg 的 GSH 标准品一支加到已配好的试剂 F 工作液 10ml 中混匀溶解;20umol/L 的 GSH 标准溶液的配制:取 1mmol/L 的 GSH 标准溶液 0.2ml 加试剂 F 工作液 9.8ml 中混匀溶解;8. 基质液的配制:
试剂 A 工作液与 1mmol/L 的 GSH 标准溶液以 1:1 混合。
操作步骤:;
(一)、样本前处理
1. 50 倍稀释的溶血液的配制:取肝素抗凝全血 20ul,以纯水稀释至 1ml,混匀,放置 5min 进行测定;配制好的溶血液要在 1 小时内测定完,否则影响酶活力;抗凝全血若当天来不及测定可冰箱 2-8℃保存,2-3 天内酶活力变化不大;
2. 组织匀浆的制备;
(1)取组织块(0.2-1g)最少可到 2-5mg,在冷的生理盐水中漂洗,去除血液,擦拭干,称重,放入 5 或10ml 的小烧杯中;
(2)加入预冷的匀浆介质(ph7.4 的 0.01mol/L Tris-Hcl,0.0001mol/L EDTA-2Na,0.01mol/L 蔗糖 0.8%的氯化钠溶液)或者用 0.86%冷生理盐水,加入的体积总量为组织块重量的 9 倍。将组织块尽可能的剪碎。
(3)机械匀浆:用组织捣碎机 10000-15000r/min 上下研磨制成 10%匀浆。
(4)将制备好的 10%匀浆用普通离心机或低温低速离心机 3000r/min 左右离心 10-15min,取上清待测;
3. 线粒体及微粒体的制备:
(1)制备 10%组织匀浆(制备方法同上);
(2)制备线粒体:取 10%组织匀浆,用普通离心机或低温低速离心机以 1000-2000r/min 离心 10min,取上清以 8000-10000r/min(低温高速离心机)离心 15min,沉淀即为线粒体;
(3)制备微粒体:取分离线粒体后的上清液,以 144000g 离心 30min,沉淀为即为微粒体;
(4)将分离的线粒体或微粒体分别用冰冷的匀浆介质制备成混悬液,机械或手工匀浆使其破碎,待测酶活力;也可反复冻融使其破碎,但有部分酶活会受影响。
4. 血清、血浆可直接取样;
(二)、血清样本操作表
计算公式:
1. 血清 GST 活力单位定义:
每毫升血清(浆)在 37℃的反应 1min,扣除非酶促反应,使反应体系中 GSH 浓度降低 1umol/L 为 1 个酶活力单位;
2. 计算公式:
血清(浆)GST 活力 = 对照 OD 值–测定 OD 值 X 标准品浓度 X 反应体系稀释÷ 反应时间 (U/ml) 标准 OD 值-空白 OD 值 (20umol/L) 倍数(6 倍) (30min)÷ 样本取样量(0.1l)
(二)、组织样本操作表
酶促反应:
显色反应:
计算公式:
1. 组织样本 GST 活力单位定义:
每毫克组织蛋白在 37℃的反应 1min,扣除非酶促反应,使反应体系中 GSH 浓度降低 1umol/L 为 1 个酶活力单位;
2. 计算公式:
组织中 GST 活力 = 对照 OD 值–测定 OD 值 X 标准品浓度 X 反应体系稀释÷反应时间÷取样量(U/mgprot) 标准 OD 值-空白 OD 值 (20umol/L) 倍数(6 倍) (10min)(0.1ml) ÷ 待测样本蛋白浓度 (mgprot/ml)
【注】:mgprot/ml 表示蛋白浓度为毫克蛋白/毫升。
(三)50 倍稀释溶血液样本检测:
酶促反应:
显色反应:
计算公式:
1. 全血中 GST 活力单位定义:
每毫升全血在 37℃的反应 1min,扣除非酶促反应,使反应体系中 GSH 浓度降低 1umol/L 为 1 个酶活力单位;
2. 计算公式:
全血 GST 活力 = 对照 OD 值–测定 OD 值 X 标准品浓度 X 反应体系稀释÷ 反应时间
(U/ml) 标准 OD 值-空白 OD 值 (20umol/L) 倍数(6 倍)(30min) ÷ 全血取样量(0.004ml)
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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