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叶绿体蛋白提取试剂盒(2D电泳用)-酶法
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详细内容
叶绿体蛋白提取试剂盒(2D电泳用)-酶法
产品货号:XY9-31837
产品规格及价格:50T/900元;100T/1600元
产品简介:
叶绿体是植物细胞所特有的能量转换细胞器,光合作用就是在叶绿体中进行的, 由于具有这一重要功能,所以叶绿体一直是细胞生物学、遗传学和分子生物学的重要研究对象。叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器。跨膜蛋白承担各种生物功能,在生物的各种发展过程中扮演重要角色。膜蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析及质谱分析等应用配套,因此膜蛋白样本制备成为一个难以逾越的挑战。
叶绿体蛋白提取试剂盒用简便的方法可以从各种植物样本中提取叶绿体蛋白,提取过程简单方便。
本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了保证。
本试剂盒提取的蛋白样本不含有高浓度的盐成分,可直接用于等电聚焦、双向电泳。如需要用于报告基因检测、SDS-PAGE电泳检测、Western blotting、凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活分析等下游实验的试剂盒,请选用其他货号的试剂盒。
产品应用:
双向电泳
产品特点:
1.使用方便。
2.含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
3.紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
4.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含 6 种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性。

使用方法:
使用注意事项:
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
2实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3.操作时必须按照下面步骤里的温度条件,否则严重影响膜蛋白的回收率。
4.提取液 C 在使用前须一直置于 2-8℃条件,否则下游膜蛋白提取时会导致不容易分层。
5.膜蛋白电泳时 loading buffer 应该避免煮沸。
6.膜蛋白电泳时可以提高 loading buffer 的 SDS 含量。
1. 提取液制备:
每 500 µl 冷的蛋白提取液 C 中加入 2 µl 蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
2. 取 500 mg-1 g 新鲜植物叶片样本,用纯水洗净擦干后去除叶梗和粗脉,用手术剪刀或锋利的刀片剪切碎,切成 0.5 mm*0.5 mm 细块。
3. 加入 500 µl 提取液 A,充分混匀。
4. 将悬液置振荡器上室温振荡 12⁻⁷2 小时。
5. 在 1000×g 条件下离心 5-10 分钟,弃上清,收集沉淀。
6. 在沉淀中加入 2 ml 提取液 B 用组织搅碎机/匀浆机/Dounce 匀浆器充分匀浆。
7. 将匀浆用 100 um 细胞筛过滤。
8. 将滤液 500×g 力离心 3 分钟。将上清移入另一干净离心管。
9. 将上清 3000×g 力离心 10 分钟。弃上清,收集沉淀。
10. 在沉淀中加入 300 µl -500 µl 蛋白提取液 C,充分混匀。 在 2-8℃条件下振荡 30-45 分钟。
11. 将提取液在 4℃,12000×g 条件下离心 5 分钟,取上清。
12. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或调整相应的浓度后直接用于下游实验。
常见问题分析:
1.蛋白浓度低?
处理部分样本时可能没有裂解完全,导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂 C 的处理时间即可。在持续振荡的条件下处理,没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
注意第 3 步处理组织样本要充分,在整个后续的离心过程中不要将叶绿体丢掉了,根据颜色判断即可。
2.用什么方法定量蛋白?
建议用 BCA 法。不适合用 Bradford 法,因为试剂中含有干扰 Bradford 法的组份,导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系,则可以用 Bradford 法定量。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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