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TaqMan miRNA反转录试剂盒
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详细内容
TaqMan miRNA反转录试剂盒
描述:miRNA 反转录试剂盒采用加 A
法进行反转录,加 A 法的反转录效率远高于茎环法,因
此,采用该方法可极大的提高检测灵敏度。
该试剂盒操作简单,仅需要两步即可轻松完成 miRNA 的
cDNA 合成,合成的 cDNA 可用于所有 miRNA 的后续定
量检测。反转录完毕后采用特异性的上游引物和接头引物
进行 PCR 扩增,FAM 标记 TaqMan 探针作为荧光报告基
团进行定量检测。
TaqMan miRNA 反转录试剂盒专用于
miRNAs 分子的反转录试验,转录获得的 cDNA 产物用于
TaqMan 定量 PCR 方法检测 miRNAs 分子(仅适用 TaqMan miRNA 定量 PCR 试剂盒
图 1,TaqMan miRNAs 定量检测原理
组分
储存:请置于-20°C,可保存 2 年;避免反复冻融
操作方法
1 按以下组分在 0.2 ml EP 管中配制应液

注意:不建议使用 Total RNA,Total RNA 试验结果通常差
于 miRNA。
2 在 PCR 仪上按以下条件进行加 A 反应:
3 反应完毕后,在上述 5µl 反应体系中加入如下试剂,并
混合均匀。

4 在 PCR 仪上按以下条件进行反转录反应:
获得的 cDNA 产物可用于多个目标 miRNA 的检测。反转录
完毕后获得的 miRNA cDNA,可加入 20~80µl ddH20 稀释
2~5 倍,通常取 2µl 即可用于 HG TaqMan miRNA 定量 PCR
试剂盒检测,该试剂盒有一万余种,详
细列表可查询 HG TaqMan miRNA qPCR kit.xls)。
5 利用 HG TaqMan qPCR Kit 对上述 miRNA cDNA 产物进
行 RealTime PCR 检测
内参基因可选择使用:TaqMan RNU6B miRNA 定量 PCR
试剂盒适用于人、鼠等哺乳动物组织、细
胞样品;TaqMan hsa-miR16 miRNA 定量 PCR 试剂盒适用于来源于人、鼠全血样品。
5.1 配制反应体系(20µl)
5.2 进行 Real-Time PCR 反应
通常采用两步法,程序如下:

(收集信号采用 FAM 染料通道,Rox 矫正信号选择 None)
5.3 反应结束后确认 Real-Time PCR 的 cDNA 样品和 NTC
阴性对照的扩增曲线。

注意事项:该产品仅供科研使用,不得用于临床诊断及其他用途,产品说明书以到货说明书为准,网站说明书仅供参考!
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