当前位置： 阿仪网 > 生物试剂/抗体/细胞 > 细胞生物学 > 感受态细胞 > 上海信裕生物科技有限公司 > 产品展示 > 细胞 > 感受态细胞 > pUC57 Simple TA/平端通用克隆载体（含感受态）
pUC57 Simple TA/平端通用克隆载体（含感受态）
价格：￥ 20T/750
品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/15 11:05:14
支付方式：
- 支付宝 微信 银行转账
产品完善度： 访问次数：608
检测试剂盒
- 人检测试剂盒/Human
- 大鼠检测试剂盒/Rat
- 猪检测试剂盒/Porcine
- 小鼠检测试剂盒/Mouse
- 豚鼠检测试剂盒/Guinea pig
- 兔检测试剂盒/Rabbit
- 山羊检测试剂盒/Goat
- 牛检测试剂盒/Bovine
- 马检测试剂盒/Equine
- 鸡检测试剂盒/Chicken
- 猴检测试剂盒/Monkey
- 其它检测试剂盒/General
- 犬检测试剂盒/Dog
- 人Elisa试剂盒
- 小鼠Elisa试剂盒
- 大鼠Elisa试剂盒
- 其他Elisa试剂盒
- 兔Elisa试剂盒
- 猪Elisa试剂盒
- 鸡Elisa试剂盒
- 猴Elisa试剂盒
- 马Elisa试剂盒
- 牛Elisa试剂盒
- 生化试剂盒
抗体
蛋白/多肽/抗原
原代细胞
细胞系
分子生物学
细胞分析
- 细胞凋亡
- 细胞周期
- 细胞增殖
- 细胞活性
- 细胞毒性
- ROS检测
- 细胞代谢
- 细胞自噬
- 细胞成像
- 细胞粘附
- 细胞pH检测
- 细胞耗氧与酸化
- 细胞示踪与追踪
- 离子指示剂及膜电位
- 吞噬、内吞、受体内化
- 细胞抑制剂
生化试剂
细胞培养基
细胞
免疫学试剂
细胞生物学
一类医疗器械产品
实验耗材
蛋白质生物学
外泌体研究
微生物
企业档案
会员类型：旗舰版
已获得阿仪网信誉 等级评定
(0 -40)基础信誉积累，可浏览访问
(41-90)良好信誉积累，可接洽商谈
(91+ )优质信誉积累，可持续信赖
阿仪网旗舰版会员：11年
工商认证 【已认证】
最后认证时间：
注册号： 【已认证】
法人代表： 【已认证】
参观次数：16003216
手机网站：http://wap.app17.com/c115321/
旗舰版网址：http://www.xybio-sh.com
详细内容
pUC57 Simple TA/平端通用克隆载体（含感受态）
描述：pUC57 Simple 通用克隆载体采用了 TOPO 酶连接技术，载体预先偶联上 TOPO 酶，当加入 PCR 扩增产物后，5 min
就可以完成连接反应，连接阳性率高。pUC57 Simple 通用克隆载体消除了大部分的常用酶切位点，便于后续亚克隆。该产
品适用于 Taq 酶扩增的含“A”尾巴和高保真酶扩增的 PCR 产物的连接，载体含有氨苄青霉素抗性筛选标记。
组分
注意：RTS DH5α 冻干感受态在未溶解状态下，可于-20℃长期保存（>2 年），已经溶解后，请-60℃以下保存（3 个月）。
主要特征
（1）快速连接，最快仅需 5min；（2）操作简单，仅需加入载体和片段即可；（3）无需蓝白斑筛选，阳性率高；（4）不包含任何酶切位点，便于后续亚克隆（5）平末端和 A 尾产物通用。
注意：引物不能磷酸化。
测序引物
正向测序引物：M13F(-47): 5’- CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC-3’；
反向测序引物：M13R(-48): 5’- AGCGGATAACAATTTCACACAGGA-3’；
操作步骤
1. PCR 产物的纯化
1.1 PCR 扩增完毕后，电泳检测产物，如无非特异性扩增、无引物二聚体、条带单一明亮，则可采用 PCR 产物纯化试剂盒纯化后用于连接。产物不经纯化也可以进行连接，但效果稍差一些。
1.2 PCR 扩增完毕后，电泳检测产物，如有非特异性扩增条带或引物二聚体，则必须采用胶回收后用于连接。
1.3 PCR 扩增模板来源于 Amp 抗性质粒，则必须采用胶回收后用于连接。
2. PCR 用量和连接时间
3. 连接反应
向 0.2 ml EP 管中依次加入如下试剂
关于 PCR 产物的用量说明：在 PCR 产物回收后（在无法进行 NanoDrop 测定浓度的情况下），按照一般的经验可估算产物
的用量，原则为：3 µl 回收产物在琼脂糖凝胶电泳后，可清晰判断的情况下，使用 0.5~1 µl 回收产物（约 5~15 ng）进行连
接即可。回收产物难以观察的情况下使用 4 µl 回收产物（约 5~10 ng）进行连接。使用过高量的 PCR 产物将会导致连接效
率低下，长斑数量和阳性率急剧下降。
4. 转化(以 RTS DH5α 克隆感受态细胞为例说明)
4.1 从-20°C 冰箱中取出 Nano E.coli Transfection Reagent 融化，放置于冰上。取 300 µl Nano E.coli TransfectionReagent 加入到一支冻干感受态细胞中，并分装到 10 支 1.5 ml EP 管中（每支 30 µl），于-60°C 以下保存（或立即使用）。
4.2 将 5 µl 连接产物加入到分装的感受态细胞中，轻弹 EP 管（或枪头轻轻吹打），置于冰上 15 min。
注意：放置时间不要超过 30 min，过长时间会导致核酸聚合，从而影响转化效价。
4.3 置于 42°C 热激 1min 后，迅速置于冰上急冷 2 min。
4.4 热激完毕后，向上述感受态细胞中加入 450 µL 不含抗生素的 SOC（或 LB）培养基，37°C 振荡（225 rpm）培养 60 min。
使质粒上抗性标记基因表达，菌体复苏。
4.5 取 200 µL 复苏菌液涂布到含相应抗生素的 LB 琼脂平板表面。
4.6 将平板置于 37°C 培养，12~18 小时后可出现菌落。
注意：如使用液体感受态，直接将 5 µl 连接后产物加入到液体感受态，并参照液体感受态操作方法即可
5. PCR 菌检挑选阳性克隆菌落（连接产物条带单一、清晰情况下，阳性率>95%，可无需菌检，直接测序，本步骤可省略）
5.1 用 10 µl Tip 头挑取生长良好的单个菌斑，放置于 10 µl 无菌水中吹打几次混合均匀。
5.2 取 1 µl 上述菌液于 20 µl PCR 体系中，用 PCR 特异性引物或者 M13F(-47)和 M13R(-48)鉴定阳性克隆。
5.3 以上述菌液为模板进行 PCR 扩增，并电泳检测（如载体自连接，则菌检 PCR 扩增长度为：140bp）。
6. 质粒提取及测序
将鉴定为阳性的菌液接种于 5ml LB 培养基中（含 100ug/ml 氨苄青霉素），37°C 振荡（225 rpm）培养过夜，提取质粒。并
使用 M13F(-47)或 M13R(-48)进行测序。
7. 常见问题及分析
（7.1）问题：平板克隆数少或不长斑
原因：通常是由于感受态效价较低造成，更换感受态可解决问题。平板为 100µg/ml 氨苄青霉素抗生素，检查是否用错。
（7.2）问题：阳性率低
原因：连接 PCR 产物有引物二聚体、连接产物条带不明亮（浓度不够）。
（7.3）问题：鉴定条带大小与预期不符
原因：PCR 产物在回收过程中发生断裂，造成小片段产物，在连接大片段时尤其严重。菌检产物大小为 140bp＋目标产物
大小，如插入片段为 500bp，则菌检阳性克隆为 640bp。
（7.4）问题：提取的质粒是否能进行酶切鉴定
回答：该载体上不携带任何常规酶切位点，除非产物自带酶切位点，否则不能酶切鉴定。
注意事项：该产品仅供科研使用，不得用于临床诊断及其他用途，产品说明书以到货说明书为准，网站说明书仅供参考！
热门标签：pUC57,Simple,TA/平端通用克隆载体（含感受态）,pUC57,Simple,TA/平端通用克隆载体,含感受态
