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HG TaqMan miRNA反转录试剂盒
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详细内容
HG TaqMan miRNA反转录试剂盒
描述:TaqMan miRNA 反转录试剂盒采用加 A法进行反转录,加 A 法的反转录效率远高于茎环法,因此,采用该方法可极大的提高检测灵敏度(原理见图 1)。该试剂盒操作简单,仅需要两步即可轻松完成 miRNA 的cDNA 合成,合成的 cDNA 可用于所有 miRNA 的后续定量检测。反转录完毕后采用特异性的上游引物和接头引物进行 PCR 扩增,FAM 标记 TaqMan 探针作为荧光报告基团进行定量检测(原理见图 1)。
TaqMan miRNA 反转录试剂盒专用于miRNAs 分子的反转录试验,转录获得的 cDNA 产物用于TaqMan 定量 PCR 方法检测 miRNAs 分子(仅适用TaqMan miRNA 定量 PCR 试剂盒,。
图 1,TaqMan miRNAs 定量检测原理
组分
储存:请置于-20°C,可保存 2 年;避免反复冻融
操作方法
1 按以下组分在 0.2 ml EP 管中配制应液

注意:不建议使用 Total RNA,Total RNA 试验结果通常差
于 miRNA。
2 在 PCR 仪上按以下条件进行加 A 反应:

3 反应完毕后,在上述 5µl 反应体系中加入如下试剂,并
混合均匀

4 在 PCR 仪上按以下条件进行反转录反应:
获得的 cDNA 产物可用于多个目标 miRNA 的检测。反转录
完毕后获得的 miRNA cDNA,可加入 20~80µl ddH20 稀释
2~5 倍,通常取 2µl 即可用于 HG TaqMan miRNA 定量 PCR
试剂盒检测,该试剂盒有一万余种,详
细列表可查询 HG TaqMan miRNA qPCR kit.xls)。
5 利用 HG TaqMan qPCR Kit 对上述 miRNA cDNA 产物进
行 RealTime PCR 检测
内参基因可选择使用:TaqMan RNU6B miRNA 定量 PCR
试剂盒(货号:TAP01501)适用于人、鼠等哺乳动物组织、细
胞样品;TaqMan hsa-miR16 miRNA 定量 PCR 试剂盒适用于来源于人、鼠全血样品。
5.1 配制反应体系(20µl)

5.2 进行 Real-Time PCR 反应
通常采用两步法,程序如下:

(收集信号采用 FAM 染料通道,Rox 矫正信号选择 None)
5.3 反应结束后确认 Real-Time PCR 的 cDNA 样品和 NTC
阴性对照的扩增曲线。

注意事项:该产品仅供科研使用,不得用于临床诊断及其他用途,产品说明书以到货说明书为准,网站说明书仅供参考!
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