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活性氧(ROS)检测试剂盒DCFHDA-绿色荧光
价格：￥ 200T/900元
品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:43:39
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详细内容
活性氧(ROS)检测试剂盒DCFHDA-绿色荧光
产品货号：XY9-47053
产品规格及价格：200T/900元
产品简介：
活性氧检测试剂盒是一种利用荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测的试剂盒。
DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜，从而使探针很容易被标记到细胞内。在活性氧存在的条件下，DCFH被氧化生成荧光物质DCF，绿色荧光强度与细胞内活性氧水平成正比，检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。
在激发波长502 nm，发射波长530 nm附近，使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测DCF 荧光强度，从而测定细胞内活性氧水平。
活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括过氧化氢（H2O2，Hydrogen peroxide）、羟基自由基（•OH，Hydroxyl radical）、单线态氧（1O2，Singlet oxygen）、一氧化氮（NO，Nitric oxide）、超氧阴离子(•O2-，Superoxide anion)、过氧化自由基(ROO• ，Peroxyl radical)、过氧羟自由基（HOO• ，hydroperoxyl）及其下游产物过氧化物过氧亚硝基阴离子（ONOO-，Peroxynitrite anion）、ClO-和羟化物等，参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。
活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生主要是氧化磷酸化的结果，在呼吸链中，在某些位点会有“泄露”的电子直接和氧气或和其他电子受体反应，在酶或非酶作用下引发一系列反应生成不同种类的活性氧：“泄露”的电子最初和氧气反应生成超氧阴离子自由基(O2•-)(图1A)。超氧阴离子遇水生成H2O2(图1B)，同时过氧化氢也可由氧气在单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)的作用下生成(图1C)，生成的过氧化氢在髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)的催化下与Cl-反应可生成ClO-(图1D)，在铁或铜离子的催化下发生Fenton反应生成OH•(图1E)，超氧阴离子遇氮氧化物反应生成ONOO-(图1F)。这些生成的高氧化活性的物质统称为活性氧。
本试剂盒可以用于各种真核培养细胞的检测。
可以为您提供各种细胞样本、切片样本、组织样本的活性氧、活性氮检测试剂盒产品。
可以为您提供总活性氧、总活性氮和各种亚型的活性氧/活性氮的检测试剂盒产品。
可以为您提供各种绿色、红色、蓝色、深红色的活性氧/活性氮检测试剂盒产品。
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可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。
可以提供各种细胞、组织染色，免疫组织化学，细胞培养等相关试剂盒产品。
产品特点：
1.使用方便：可用激光共聚焦显微镜直接拍照分析、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测；
2.背景低，灵敏度高；
3.线性范围宽，使用方便。
使用方法：
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
2.DCFHDA 荧光探针在 2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。
4.探针标记完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的标记情况是否正常。
5.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。
6.对于某些细胞，如果发现没有刺激的阴性对照细胞荧光也比较强，可以按照 1:2000-1:10000 稀释 DCFHDA。探针标记的时间也可以根据情况在 15-60 分钟内适当进行调整。
7.原位检测必须使用荧光检测专用的黑色透明底 96 孔细胞培养板。
8.以下操作步骤仅供参考，请根据实际样本情况调整或参考文献。
一、 探针标记
原位标记：仅适用于贴壁培养细胞。
1. 按照 1:1000-2000 用无酚红无血清培养基稀释 DCFH-DA。
2. 去除细胞培养基，用 PBS 洗细胞一次。
3. 加入适当体积稀释好的 DCFH-DA。加入的体积以能充分盖住细胞为宜，通常对于 96 孔板每孔加入 100-200 µl 染色液，六孔板的一个孔加入稀释好的 DCFH-DA 不少于 1 毫升。
4. 在 37℃细胞培养箱内避光孵育 20-60 分钟。
5. 用无血清细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的 DCFH-DA。
收集后标记：悬浮细胞或贴壁细胞消化处理
1. 按照 1:1000-2000 用无酚红无血清培养基稀释 DCFH-DA。
2. 离心移除培养基，用 PBS 洗细胞一次。
3. 细胞收集后悬浮于稀释好的 DCFH-DA 中，细胞浓度为 1*106-2*107/毫升，37℃细胞培养箱内避光孵育 0-60 分钟。每隔 3-5 分钟颠倒混匀一下，使探针和细胞充分接触。
4. 用无血清细胞培养基洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的 DCFH-DA。
5. 用无血清细胞培养基重悬细胞。
二、 检测：
对于原位标记探针的样品可以用激光共聚焦显微镜直接拍照分析，或收集细胞后用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。
对于收集细胞后标记探针的样品可以用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测，用激光共聚焦显微镜直接观察也可以。
使用 488nm 激发波长，525nm 发射波长，实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。DCF 的荧光光谱和FITC 非常相似，可以用 FITC 的参数设置检测 DCF。
常见问题分析：
1.活性氧结果如何分析？
ROS 是多种物质的统称，不像某一单一活性氧指标，无法检测其绝对的含量，只能通过设置参照样本，以参照样本的倍数来反映目标样本相对含量变化，这个“相对”是针对参照的。
分析结果是定性的，也是没有单位的，因为它本质上是一个比值（目标/参照）。反映的是模型样本通过具体的干预措施（如养分缺失、缺氧、药物治疗或遗传基因操控等）如何影响其 ROS 的变化，测定其 ROS 是增加或者降低了。
2.荧光照片如何分析？
需要有相关的荧光强度分析软件。ROS 表达水平直接通过荧光信号的强弱和分布范围来体现。
有的显微镜扫描下来的图像本身就可以测面积和强度，可以同时测不同颜色的荧光强度。有的显微镜不支持此功能，可以将荧光染色彩色图像转换为黑白的灰度图，然后再以灰度值作为测量指标进行分析。
要结合明场的照片具体分析。如果细胞分布均匀可以算固定面积荧光强度。成像时中心和四周有差异时，一般将四周剪切掉也可以。如果细胞分布不匀，需要找到细胞分布匀称的视野，一个视野一个视野找。
如果要用图片做结果，就要平行做多个图片，作分析，统计，每张都要求荧光分布尽量一致。
为了去除杂光的影响，可以适当调节统计荧光的强度范围，将信号过弱的背景杂光去除掉。
对照组和实验组整张图片需要做同样的处理，保证所有参数均要一致。
对于不同情况荧光强度的统计方法，根据实验需要或参考文献。可以算等面积的平均强度；也可以算阈值高于一定值的平均强度；也可以算荧光的累积而不算平均。要根据课题需要选择合适的测量统计方法。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
热门标签：活性氧,绿色荧光,活性氧(ROS)检测试剂盒DCFHDA-绿色荧光
