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过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(微板,紫外)
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详细内容
过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(微板,紫外)
产品货号:XY9-47044
产品规格及价格:100T/800元
产品简介:
过氧化氢酶(CAT)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是最主要的H2O2清除酶,在活性氧清除系统中具有重要作用。
过氧化氢酶(Catalase,CAT)又称触酶,是一类以铁卟啉为辅基的结合酶,由四个相同亚单位组成的四聚体酶,共含4分子的亚铁血红素作为辅基,分子量约为24KD。CAT能将细胞代谢产生的毒性物质过氧化氢迅速清除,可与GSH-Px共同保护巯基酶、膜蛋白、过氧化氢解离。
过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(微板法)检测原理是在最佳酶反应条件下,CAT能够分解H2O2,H2O2在240nm下有特征吸收峰,CAT使反应溶液240nm下的吸光度随反应时间而下降,根据吸光度的变化率可计算出CAT活性。
可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。
可以为您提供各种颜色的 M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。
可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。

使用方法:
1. 测定血清和血浆时,如果样本不溶血,每批样本只需要随机挑选 2 个样本做空白或者用双蒸水代替样本做空白;如果样本溶血的话,必须每个样本做空白对照。
2. 测定全血时,必须每个样本都设定空白对照;
3. 测定组织匀浆时,如果样本不是高脂,每批样本只需随机挑选 2 个样本做空白或者用双蒸水代替样本做空白;如果样本高脂的话,必须每个样本做空白对照;
4. 所有实验用水均需使用纯水或双蒸水。
5. 需使用一次性塑料试管,若没有,使用较新的玻璃管并洗刷干净。
6. 试剂 D 天冷后会凝固,待 37℃水浴变澄清时再使用。
酶液提取: 1. 细胞或组织样品的制备:
(1)培养细胞:
先收集细胞到离心管内,离心后弃上清;
按照细胞数量 (104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取
液),超声波破碎细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 8000g 4℃离心
10min,取上清,置冰上待测。
(2)组织:
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织, 加入 1mL 提取液),
进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2. 血清(浆)样品:直接检测。
CAT 测定:
1. 酶标仪预热 30min 以上,检测波长 240nm,蒸馏水调零。
2. 测定前将 CAT 检测工作液在 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 10min 以上。
3. 准备 96 孔 UV 板一块。
【注】:
非普通酶标板,普通酶标板只能透过可见光,不能透过紫外光,检测波长小于 340nm 务必使用 UV 板。
4. 在 96 孔 UV 板中加入 10µL 待测样本和 190µL 工作液,充分混匀,记录 240nm 下初始吸光值 A1 和 1min 后
的吸光值 A2。
5. 计算 ΔA=A1-A2。
CAT 活力计算:
1. 血清(浆)中 CAT 活力计算:
单位的定义:每毫升血清(浆)每分钟催化 1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。
CAT(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样÷T
=918×ΔA
2. 组织、细胞中 CAT 活力计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化 1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。
CAT(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109 ]÷(V 样×Cpr) ÷T
=918×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每 g 组织每分钟催化 1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。CAT(nmol/min /g 鲜
重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109 ]÷(W×V 样÷V 样总)÷T
=918×ΔA÷W
(3)按细胞密度计算:
单位的定义:每 1 万个细胞每分钟催化 1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。
CAT(nmol/min /104cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109 ]÷(500×V 样÷V 样总)÷T =1.836×ΔA
【注】:
V 反总:反应体系总体积,2×10-4 L;
ε:H2O2 摩尔消光系数,4.36×104 L / mol /cm;
d: 96 孔板光径,0.5cm;
V 样:加入样本体积,0.01 mL;
V 样总:加入提取液体积,1 mL;
T: 反应时间,1 min;
W:样本质量,g;
Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;
500:细胞总数,500 万。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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