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热敏磷酸酶使用说明书
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上传时间：2015/10/26 12:33:51
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上 传 者：北京百奥莱博科技有限公司
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| 产品及特点 | 本产品是从南极微生物中克隆并在大肠杆菌中表达的热敏磷酸酶，它能催化除去DNA或RNA末端的5′磷酸基团。由于磷酸酶处理后的DN段缺少连接酶所要求的5′磷酸末端，因此它们不能进行自连接。这个特性可以在克隆时降低载体DNA的背景。本产品具有下列特点： 1. 除去 DNA、RNA、rNTPs 和 dNTPs 5＇ 末端的磷酸基团。 2. 防止克隆载体的自连接。 3. 蛋白质丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸的去磷酸化。 4. 为 5＇ 末端标记准备模板。 5. 去除PCR产物中的dNTP和焦磷酸盐。 6. 无核酸内切酶、外切酶、RNase污染，SDS-PAGE电泳经考马斯亮蓝染色检测其纯度大于95%。 7. 70℃加热5分钟可使酶完全失活。 | ||||||||||||
| 规格及成分 |
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| 运输及保存 | 低温运输，-20℃保存，有效期一年。 | ||||||||||||
| 自备试剂 | 无 | ||||||||||||
| 使用方法 | 载体去磷酸化实验举例： 1. 限制性内切酶酶切1-5 μg载体DNA，向内切酶反应Buffer中加入1/10体积的10×热敏磷酸酶反应Buffer。 2. 加入1 μL热敏磷酸酶（5 U），混匀。 3. 5＇ 末端或者平末端于37℃温育15分钟，3＇ 末端于37℃温育60分钟。 4. 70℃温育5分钟热失活（或者按照限制性内切酶的要求失活）。 5. 进行连接反应。 | ||||||||||||
| 相关信息 | 活性单位定义: 1单位指在37℃条件下，30分钟能使1 μg经HindIII(产生5＇突出末端)、EcoRV (产生平齐末端)或PstI(产生5＇凹陷末端)消化的pUC19 DNA去磷酸化所需的酶量。去磷酸化标准是指在自连接反应中能抑制> 95%的DNA再环化 (通过转化 E. coli 细胞来检测) 。 反应条件： 1× 热敏磷酸酶反应缓冲液 [50 mM Bis Tris-丙烷-HCl，1 mM MgCl2， 0.1mM ZnCl2 (pH 6.0 @25℃)]。37℃温育。 储存Buffer成分： 10 mM Tris-HCl，1 mM MgCl2，1 mM DTT，50% Glycerol，0.01 mM ZnCl2，pH 7.4 @ 25℃。 | ||||||||||||
| 关联产品 | T4聚核苷酸激酶（CAT#:120506） | ||||||||||||
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